ASKAマウスを用いたケミカルジェネティクスによる生体内在性結合タンパク質分離法

2013 年度 実施状況報告書

• 研究課題/領域番号: 25650061
• 研究種目: 挑戦的萌芽研究
• 研究機関: 東京大学
• 研究代表者: 一條 秀憲 東京大学, 薬学研究科(研究院), 教授 (00242206)
• 研究期間 (年度): 2013-04-01 – 2015-03-31
• キーワード: ASKAマウス / ASK1 / ケミカルバイオロジー

研究概要

本研究においては、フォワードケミカルジェネティクス的精製法を確立し、各種初代培養細胞から内在性ASK1複合体を精製することを目的としてい る。アミノ酸置換を施すことによりATPアナログが結合可能となったASK1(as-ASK1)がノックインされたマウスより得たサンプルを用いて、 化合物プルダウン法を行うことによって、より生理的な環境下でのASK1結合因子が同定されることが期待される。
現時点で、この手法を用いたプルダウン法の系の大枠を構築することに成功しており、ある種の細胞においては高効率での精製が可能であることが示さ れた。今後は、MASS解析を用いて結合分子を同定することにより、ASK1の新たな生理機能の解明に繋げたいと考えている。

現在までの達成度 (区分)

2: おおむね順調に進展している

理由

研究初年度においては、プルダウン法に用いる担体に結合可能で、且つASK1との結合能が低下しないATPアナログ改変体を得ることが大きな目標 であった。あらゆる検討を行った結果、上記に該当する化合物を得ることに成功し、その化合物を用いたプルダウン解析の系構築に着手することができた。さらにある種の細胞においては、内在性ASK1複合体を精製することに成功しており、今後の解析が期待される。

今後の研究の推進方策

現在までにATPアナログ改変体を用いたプルダウン系の大枠が出来上がっているため、今後は結合分子同定へと積極的に進んでいきたい。また、この精製系をあらゆる細胞種を用いて検討し、極力多くの情報を得ることができるよう努めていく所存である。

研究成果

• [雑誌論文] The DEAH-Box RNA Helicase DHX15 activates NF-κB and MAPK signaling downstream of MAVS during antiviral responses. (2014)
  • 著者名/発表者名: Mosallanejad, K., Sekine, Y., Ishikura-Kinoshita, S., Kumagai, K., Nagano, T., Matsuzawa, A., Takeda, K., Naguro, I. and Ichijo, H.
  • 雑誌名: Sci. Signal. 巻: 7 ページ: ra40
  • DOI: 10.1126/scisignal.2004841
  • 査読あり
• [雑誌論文] ASK1 promotes the contact hypersensitivity response through IL-17 production. (2014)
  • 著者名/発表者名: Mizukami, J. Sato, T., Camps, M., Ji, H., Rueckle, T., Swinnen, D., Tsuboi, R., Takeda, K. and Ichijo, H.
  • 雑誌名: Sci. Rep. 巻: 4 ページ: 4
  • DOI: 10.1038/srep04714
  • 査読あり
• [雑誌論文] Depletion of apoptosis signal-regulating kinase 1 prevents bile duct ligation-induced necroinflammation and subsequent peribiliary fibrosis. (2014)
  • 著者名/発表者名: Noguchi, H., Yamada, S., Nabeshima, A., Guo, X., Tanimoto, A., Wang, K.Y., Kitada, S., Tasaki, T., Takama, T., Shimajiri, S., Horlad, H., Komohara, Y., Izumi, H., Kohno, K., Ichijo, H. and Sasaguri, Y.
  • 雑誌名: Am. J. Pathol. 巻: 184 ページ: 644-661
  • DOI: 10.1016/j.ajpath.2013.11.030
  • 査読あり
• [雑誌論文] The expression of Fn14 via mechanical stress-activated JNK contributes to apoptosis induction in osteoblasts. (2014)
  • 著者名/発表者名: Matsui, H., Fukuno, N., Kanda, Y., Kantoh, Y., Chida, T., Nagaura, Y., Suzuki, O., Nishitoh, H., Takeda, K., Ichijo, H., Sawada, Y., Sasaki, K., Kobayashi, T. and Tamura, S.
  • 雑誌名: J. Biol. Chem. 巻: 289 ページ: 6438-6450
  • DOI: 10.1074/jbc.M113.536300
  • 査読あり
• [雑誌論文] Roquin-2 promotes ubiquitin-mediated degradation of ASK1 to regulate stress responses. (2014)
  • 著者名/発表者名: Maruyama, T., Araki, T., Kawarazaki, Y., Naguro, I., Heynen, S., Aza-Blanc, P., Ronai, Z., Matsuzawa, A. and Ichijo, H.
  • 雑誌名: Sci. Signal. 巻: 7 ページ: ra8
  • DOI: 10.1126/scisignal.2004822
  • 査読あり
• [雑誌論文] Apoptosis Signal-regulating Kinase 1 is a novel target molecule for cognitive impairment induced by chronic cerebral hypoperfusion. (2014)
  • 著者名/発表者名: Toyama, K., Koibuchi, N., Uekawa, K., Hasegawa, Y., Kataoka, K., Katayama, T., Sueta, D., Jie Ma, M., Nakagawa, T., Yasuda, O., Tomimoto, H., Ichijo, H., Ogawa, H. and Kim-Mitsuyama, S.
  • 雑誌名: Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol. 巻: 34 ページ: 616-625
  • DOI: 10.1161/ATVBAHA.113.302440
  • 査読あり
• [雑誌論文] Requirement of apoptosis-inducing kinase 1 for the induction of bronchial asthma following stimulation with ovalbumin. (2013)
  • 著者名/発表者名: Takada, E., Furuhata, M., Nakae, S., Ichijo, H., Sudo, K. and Mizuguchi, J.
  • 雑誌名: Int. Arch. Allergy Immunol. 巻: 162 ページ: 104-114
  • DOI: 10.1159/000353240
  • 査読あり
• [雑誌論文] SOD1 as a molecular switch for initiating the homeostatic ER stress response under zinc deficiency. (2013)
  • 著者名/発表者名: Homma, K., Fujisawa, T., Tsuburaya, N., Yamaguchi, N., Kadowaki, H., Takeda, K., Nishitoh, H., Matsuzawa, A., Naguro, I., and Ichijo, H.
  • 雑誌名: Mol. Cell 巻: 52 ページ: 75-86
  • DOI: 10.1016/j.molcel.2013.08.038
  • 査読あり
• [雑誌論文] . Integration of the Apoptosis signal-regulating kinase 1-mediated stress signaling with the Akt/PKB-IκB kinase cascade. (2013)
  • 著者名/発表者名: Puckett, M.C., Goldman, E.H., Cockrell, L.M., Huang, B., Kasinski, A.L., Du, Y., Wang, C.Y., Lin, A., Ichijo, H., Khuri, F. and Fu, H.
  • 雑誌名: Mol. Cell. Biol. 巻: 33 ページ: 2252-2259
  • DOI: 10.1128/MCB.00047-13
  • 査読あり
• [雑誌論文] Involvement of ASK1-p38 pathway in the pathogenesis of diabetes triggered by pancreatic ß cell exhaustion. (2013)
  • 著者名/発表者名: Yamaguchi, K., Takeda, K., Kadowaki, H., Ueda, I., Namba, Y., Ouchi, Y. Nishitoh, H. and Ichijo, H.
  • 雑誌名: Biochim. Biophys. Acta. 巻: 1830 ページ: 3656-3663
  • DOI: 10.1016/j.bbagen.2013.01.029
  • 査読あり
• [学会発表] Stress Signaling in Cell Death and Disease (2013)
  • 著者名/発表者名: Hidenori Ichijo
  • 学会等名: The 8th Japan-Korea conference on cellular signalling for young scientists
  • 発表場所: 福岡県福岡市
  • 年月日: 20131106-20131107
• [学会発表] レドックス場としてのASK1シグナル複合体と細胞死 (2013)
  • 著者名/発表者名: 一條秀憲
  • 学会等名: 第86回日本生化学会大会
  • 発表場所: 兵庫県神戸市
  • 年月日: 20130911-20130913
• [学会発表] Regulation of cell death signals by ubiquitination and deubiquitination (2013)
  • 著者名/発表者名: Hidenori Ichijo
  • 学会等名: The 35th Naito Conference The Ubiquitin-proteasome system-
  • 発表場所: 北海道札幌市
  • 年月日: 20130709-20130712