ASKAマウスを用いたケミカルジェネティクスによる生体内在性結合タンパク質分離法

2014 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 25650061
• 研究機関: 東京大学
• 研究代表者: 一條 秀憲 東京大学, 薬学研究科(研究院), 教授 (00242206)
• 研究期間 (年度): 2013-04-01 – 2015-03-31
• キーワード: ASK1 / 複合体精製 / ケミカルバイオロジー

研究実績の概要

本研究においては、ケミカルバイオロジー的精製法を確立し、各種組織および初代培養細胞から内在性ASK1複合体を精製することを目的としている。具体的には、ある種のアミノ酸置 換を複数施すことによりATPアナログが結合可能となったASK1(as-ASK1)がノックインされたマウス由来のサンプルを用いる。
これまでは、HEK293A細胞をはじめとする一般的な細胞株を用いた結合分子解析が主に行われてきた。しかしながら、当該マウス由来の組織もしくは初代 培養細胞の溶解液を用いて化合物プルダウン法を行うことによって、より生理的な環境下でのASK1結合因子が同定されることが期待される。さらには、組織/細胞種特異的なASK1複合体構成因子を同定することによって、その部位特異的なASK1の新たな機能を探索することができると考えている。
多岐にわたる条件検討を行った結果、新規化合物プルダウン法の系構築に成功した。現時点ですでに複数種類の細胞において高効率 精製が可能であることが示されている。また、本法を用いてASK1複合体構成因子の同定をLC-MS/MSの系によって試みた結果、これまで報告のない新たな結合分子候補を多数得ることができた。そのうちいくつかの分子に関してはASK1との結合を共免疫沈降実験により確認しているため、本研究において開発された新規精製法によって新規結合分子が同定されたと言える。
今後は、新たに同定した結合分子自身の機能、および同定された部位の特徴に注目をして、ASK1の新たな生理機能に迫っていきたいと考えている。

研究成果

• [雑誌論文] Mitochondrial proteolysis: Its emerging roles in stress responses. (2015)
  • 著者名/発表者名: Sekine, S. and Ichijo, H.
  • 雑誌名: B.B.A. 巻: 1850 ページ: 274-280
  • DOI: 10.1016/j.bbagen.2014.10.012
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] The DEAH-Box RNA Helicase DHX15 activates NF-κB and MAPK signaling downstream of MAVS during antiviral responses (2014)
  • 著者名/発表者名: Mosallanejad, K., Sekine, Y., Ishikura-Kinoshita, S., Kumagai, K., Nagano, T., Matsuzawa, A., Takeda, K., Naguro, I. and Ichijo, H.
  • 雑誌名: Sci. Signal. 巻: 7 ページ: ra40
  • DOI: 10.1126/scisignal.2004841
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Roquin-2 promotes ubiquitin-mediated degradation of ASK1 to regulate stress responses (2014)
  • 著者名/発表者名: Maruyama, T., Araki, T., Kawarazaki, Y., Naguro, I., Heynen, S., Aza-Blanc, P., Ronai, Z., Matsuzawa, A. and Ichijo, H.
  • 雑誌名: Sci. Signal. 巻: 7 ページ: ra8
  • DOI: 10.1126/scisignal.2004822
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Lysosome rupture-activated TAK1-JNK pathway regulates NLRP3 inflammasome activation. (2014)
  • 著者名/発表者名: Okada, M., Matsuzawa, A., Yoshimura, A. and Ichijo, H.
  • 雑誌名: J. Biol. Chem. 巻: 289 ページ: 32926-32936
  • DOI: 10.1074/jbc.M114.579961
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [学会発表] ミトコンドリアストレスシグナルの機能解析 (2014)
  • 著者名/発表者名: 一條秀憲
  • 学会等名: 第87回日本生化学会大会
  • 発表場所: 横浜
  • 年月日: 2014-10-15 – 2014-10-18
• [学会発表] SOD1 as a molecular switch for initiating the homeostatic ER stress response under conditions of zinc deficiency (2014)
  • 著者名/発表者名: Homma, K., Ichijo, H.
  • 学会等名: The 4th International ISZB Meeting
  • 発表場所: CA, USA
  • 年月日: 2014-09-14 – 2014-09-19
• [学会発表] Oxidative stress-activated kinase ASK1 is involved in the tumorigenesis and tumor metastasis (2014)
  • 著者名/発表者名: Naguro, I., Kamiyama, M., Ichijo, H.
  • 学会等名: Thiol-Based Redox Regulation & Signaling(Gordon Research Conference)
  • 発表場所: Girona, Spain
  • 年月日: 2014-07-20 – 2014-07-25
• [学会発表] Ubiquitin-dependent regulation of ASK1 stress signaling in cell death (2014)
  • 著者名/発表者名: Hidenori Ichijo
  • 学会等名: 2014 KSBMB Annual Meeting
  • 発表場所: COEX, Seaul, Korea
  • 年月日: 2014-05-14 – 2014-05-16