研究課題
本研究は、ファイトプラズマ等の難培養性植物病原細菌の培養系・形質転換系の確立に向けた基盤を構築することを目的としている。ファイトプラズマは複数種類の染色体外DNAを有するため、これらが形質転換系のシャトルベクターに利用可能かどうかを検討した。申請者の過去の研究により、タマネギ萎黄病（OY）ファイトプラズマが有するすべての染色体外DNAがクローニングされ、塩基配列が解読されている。OYファイトプラズマは、ウイルス型の複製酵素を持つ「染色体外DNA（EcDNA）」と、バクテリア型の複製酵素をもつ「プラスミド」の2種類に大きく分けられる。それらのうち、プラスミドのほうがサイズがコンパクトであり複製量が多い。これまでに、プラスミドに関して複製酵素遺伝子を含む部分配列からなる複製の最小単位を特定した。また、昆虫宿主、植物宿主の両宿主において安定的に遺伝子発現が可能なファイトプラズマプロモーター領域を特定した。今回、これらの成果を利用して、シャトルベクターを構築するとともに、ファイトプラズマのゲノムにマーカー遺伝子を組み込むための遺伝子カセットを構築した。マーカー遺伝子としては、蛍光タンパク質や抗生物質耐性タンパク質をコードする遺伝子を用いることとし、いずれもファイトプラズマのゲノム情報にもとづいて使用コドンの最適化をおこない、ファイトプラズマ細胞内において高効率に翻訳され発現するようにした。
すべて 2014
すべて 雑誌論文 (2件) (うち査読あり 2件、 オープンアクセス 1件、 謝辞記載あり 2件)
Scientific Reports
巻: 4 ページ: 7399
10.1038/srep07399
FEMS Microbiology Letters
巻: 361 ページ: 115-122
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