Argonaute 2 (Ago2)は、RNA-induced silencing complex (RISC)の主要構成成分であり、Post-transcriptional Gene silencingを担う最も重要な因子である。これまでにAgo2が細胞質のみならず核にも局在することが報告されているが、Ago2の核移行メカニズムは明らかとなっていないことから、Ago2の核移行メカニズムを解明することを試みた。昨年度までにAgo2のなかで、あるタンパク質(タンパク質Xとする)との結合に重要な領域に変異を導入することによりAgo2の核移行が抑制されることを見出している。そこで本年度は、核に移行しない変異型Ago2とタンパク質Xとの相互作用について検討した。免疫沈降方により野生型および変異型Ago2とタンパク質Xとの相互作用について検討したところ、核に移行する変異型Ago2はタンパク質Xと結合していたのに対し、核に移行しない変異型Ago2はタンパク質Xとの結合が減弱していた。さらにタンパク質Xをノックダウンすることで、Ago2の核移行が大きく減弱した。また共焦点レーザー顕微鏡および免疫染色法を用いてAgo2の細胞内局在を検討したところ、Western blottingの結果を支持する結果が得られた。以上の結果より、タンパク質XによってAgo2が核に移行していることが示唆された。上記に加えて、トランスクリプトーム解析によりAgo2に結合し核移行に関与するタンパク質を探索している。
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