研究課題
機能未知のヒト遺伝子や遺伝子異常が原因とされる疾患を解析する場合、マウスやラットなど哺乳動物の遺伝子改変動物を作製することが従来から行われてきた。近年になり、下等生物からヒトまでのさまざまな生物のゲノム構造(遺伝子配列)が報告され、多くの遺伝子にヒトホモログhomolog(オーソログortholog)が存在することが判明した。したがって、それぞれの遺伝子の解析の際、条件に合った実験生物モデルを選択することが重要となる。カイコ(幼虫:約8 cm、6 g)は、個体サイズが成体マウス(5 cm、約25 g)に近いので生化学的および形態学的解析が可能であり、かつショウジョウバエ研究のように遺伝子操作が容易であるので、ヒト疾患モデル生物として利用価値が高い。本申請では、これらの利点に基づき、ヒト遺伝性疾患解析のモデル生物としてカイコを利用するための汎用性カイコ内遺伝子発現システムを樹立することを進めた。まず、EGFP、Ds-Red及びルシフェラーゼ(Luc) cDNAをAcNPV系バキュロウイルス発現ベクター系にサブクローニングし、接種実験用のウイルスを作製した。九州大学遺伝子資源開発研究センターから分与可能なカイコ系統のうち、AcNPVが感染し発現可能性の高い各種のカイコ系統(c11, d17, f10系統など)を譲り受けた。次にどの時期に接種することでウイルス病原性の影響が少なく、かつ目的遺伝子が高発現するかを検討した。さらに、遺伝子以降効率を上げるためにpiggyBacレトロポゾンシステムを使用し、ゲノム移入の効率を上げることを検討した。移入遺伝子の一過性遺伝子発現は認められるものの、病原性を下げることが困難であったため、ゲノム移入まで到達した個体を認めることはできなかった。
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