腸管腫瘍形成過程のKLF5/4複合体の統合的解析と核酸医薬による大腸癌治療法開発

2014 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 25670197
• 研究機関: 東京医科大学
• 研究代表者: 黒田 雅彦 東京医科大学, 医学部, 教授 (80251304)
• 研究分担者: 仲矢 丈雄 東京医科大学, 医学部, 助教 (80512277)
• 研究期間 (年度): 2013-04-01 – 2015-03-31
• キーワード: KLF4 / KLF5 / 大腸がん / がん幹細胞

研究実績の概要

1. FLAG-HAダブルタグ付きc-Myc・KLFノックインマウスの作成:申請者らは、KLF4の遺伝子座のN末端に3xFLAG-HAタグ配列を挿入されたターゲッティングベクターを作成した。さらに本ベクターをES細胞に導入して、相同組換えによりゲノム遺伝子座に正しく3xFLAG-HA配列を挿入されたES細胞クローンを得ることができた。このタグ付きKLF4タンパクを発現するES細胞クローンを胚にインジェクションし、現在このES細胞由来のキメラマウスを作成した。このKLF4ノックインマウスがin vivoでタグ付きKLF4タンパクを発現することをマウス組織から採取した蛋白のWestern Blottingで確認した。これらのマウスを用いて研究を進める予定である。KLF5については、挿入配列を含め、どのようにすればタグ付きKLF5タンパクがノックインアリルから発現するかについて検証しマウスを作成している。

2. FLAG-HAダブルタグ付きES細胞におけるKLF5・KLF4・c-Myc・Tcl-7l蛋白複合体解析とCHIP sequence法による各蛋白複合体のDNA結合領域の解明:KLF4のダブルタグノックインES細胞の全タンパク抽出液を抗FLAG抗体ビーズで免疫沈降した産物を3xFLAGペプチド、酸、サンプルバッファーで溶出し、その免疫沈降産物中にFLAGタグ付きKLF4タンパクが含まれていることを、抗KLF4抗体、抗FLAG抗体を用いたWestern ブロッティング法で確認した。現在次世代シークエンサーによるDNA結合領域の網羅的な同定とを組み合わせた、CHIP sequence法を準備している。

研究成果

• [雑誌論文] Ovarian small cell carcinoma of pulmonary type appearing in ante mortem ascites: An aoutopsy case and review of the literature. (2015)
  • 著者名/発表者名: Hashimoto H, Kurata A, Fujita K, Shimada H, Nagai T, Horiguchi H, Kuroda M
  • 雑誌名: Human Pathology 巻: EHPC-00037 ページ: EHPC-00037
  • DOI: doi: 10.1016/j.ehpc.2015.02.003.
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Angiopoietin-like 7 is an anti-angiogenic protein required to prevent vascularization of the cornea. (2015)
  • 著者名/発表者名: Toyono T, Usui T, Yokoo S, Taketani Y, Nakagawa S, Kuroda M, Yamagami S, Amano S.
  • 雑誌名: PLoS One 巻: 10 ページ: e0116838
  • DOI: doi: 10.1371/journal.pone.0116838.
  • 査読あり / オープンアクセス / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Inhibition of choroidal fibrovascular membrane formation by new class of RNA interference therapeutic agent targeting periostin. (2015)
  • 著者名/発表者名: Nakama T, Yoshida S, Ishikawa K, Kobayashi Y, Zhou Y, Nakao S, Sassa Y, Oshima Y, Takao K, Shimahara A, Yoshikawa K, Hamasaki T, Ohgi T, Hayashi H, Matsuda A, Kudo A, Nozaki M, Ogura Y, Kuroda M and Ishibashi T.
  • 雑誌名: Gene Therapy 巻: 22 ページ: 127-137
  • DOI: doi: 10.1038/gt.2014.112.
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Immaturity of mooth muscle cells in the neointima is associated with acute coronary syndrome. (2015)
  • 著者名/発表者名: Horita A, Kurata A, Ohno S, Shimoyamada H, Saito I, Kamma H, Kuroda M.
  • 雑誌名: Cardiovasc Pathol 巻: 24 ページ: 26-32
  • DOI: doi:10.1016/j.carpath.2014.09.003
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Evaluation of the Human Papillomavirus mRNA Test for the detection of cervical lesions in Japan. (2015)
  • 著者名/発表者名: Nakayama Y, Yamada M, Kurata A, Kiseki H, Kuroda M.
  • 雑誌名: Eur J Gynaec Oncol 巻: in press ページ: inpress
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Unique expression pattern of viral proteins in human herpesvirus 8-positive plasmablastic lymphoma: a case report. (2014)
  • 著者名/発表者名: Yamada M, Katano H, Yotsumoto M, Hashimoto H, Muramatsu T, Shiotsuka M, Fukutake K, Kuroda M.
  • 雑誌名: Int J Clin Exp Pathol. 巻: 7 ページ: 6415-6418
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] In vivo challenging of polymyxins and levofloxacin eye drop against multidrug-resistant Pseudomonas aeruginosa keratitis. (2014)
  • 著者名/発表者名: Tajima K, Miyake T, Koike N, Hattori T, Kumakura S, Yamaguchi T, Matsumoto T, Fujita K, Kuroda M, Ito N, Goto H.
  • 雑誌名: J Infect Chemother. 巻: 20 ページ: 343-349
  • DOI: doi: 10.1016/j.jiac.2013.10.015.
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Multifocal Kaposiform Hemangioendothelioma in Multiple Visceral Organs: An Autopsy of 9-Day-Old Female Baby. (2014)
  • 著者名/発表者名: Takeo Nakaya, Kiyoko Morita, Atsushi Kurata,Tetsuo Ushiku, Takashi Igarashi, Masahiko Kuroda, Masashi Fukayama.
  • 雑誌名: Human Pathology. 巻: 45 ページ: 1773-1777
  • DOI: doi: 10.1016/j.humpath.2014.03.019
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Young-age-onset pancreatoduodenal carcinoma in Shwachman-Diamond syndrome. (2014)
  • 著者名/発表者名: Nakaya T, Kurata A, Hashimoto H, Nishimata S, Kashiwagi Y, Fujita K, Kawashima H, Kuroda M.
  • 雑誌名: Pathol Int 巻: 64 ページ: 75-80
  • DOI: doi: 10.1111/pin.12133.
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [学会発表] 浸潤性乳癌に出現するlet-7d発現細胞の検討． (2015)
  • 著者名/発表者名: 藤田浩司、山田正俊、高梨正勝、黒田雅彦．
  • 学会等名: 第104回日本病理学会総会
  • 発表場所: 名古屋
  • 年月日: 2015-04-30 – 2015-05-02
• [学会発表] 肺線維症に対するmiR-29b 補充療法． (2015)
  • 著者名/発表者名: 山田侑子、高梨正勝、須藤カツ子、上田しのぶ、黒田雅彦．
  • 学会等名: 第104回日本病理学会総会
  • 発表場所: 名古屋
  • 年月日: 2015-04-30 – 2015-05-02
• [学会発表] 胃癌細胞株の形態変化における、上皮間葉系移行に関わるマイクロRNA200cとその標的の検出 (2015)
  • 著者名/発表者名: 倉田 厚、山田正俊、大野慎一郎、橋本浩次、藤田浩司、高梨正勝、黒田雅彦．
  • 学会等名: 第104回日本病理学会総会
  • 発表場所: 名古屋
  • 年月日: 2015-04-30 – 2015-05-02
• [学会発表] 肺がん治療を想定した副作用の少ない短鎖型新規核酸医薬の開発. (2015)
  • 著者名/発表者名: 大野慎一郎、板野華蓮、原田裕一郎、浅田浩太朗、老川桂生、柏迫幹絵、高梨正勝、須藤カツ子、池田徳彦、黒田雅彦.
  • 学会等名: 第104回日本病理学会総会
  • 発表場所: 名古屋
  • 年月日: 2015-04-30 – 2015-05-02
• [学会発表] microRNA 生成経路を欠損する肺がん細胞株の解析． (2015)
  • 著者名/発表者名: 老川桂生、浅田浩太朗、大野慎一郎、黒田雅彦．
  • 学会等名: 第104回日本病理学会総会
  • 発表場所: 名古屋
  • 年月日: 2015-04-30 – 2015-05-02
• [学会発表] Development of novel form of mimic microRNA for lung cancer therapy. (2015)
  • 著者名/発表者名: Ohno S, Itano K, Harada Y, Asada K, Oikawa K, Kashiwazako M, Takanashi M, Sudo K, Ikeda N, Kuroda M.
  • 学会等名: AACR Annual Meeting 2015.
  • 発表場所: Philadelphia, Pennsylvania, USA
  • 年月日: 2015-04-18 – 2015-04-22
• [学会発表] The development of short form of mimic microRNA for lung cancer therapy. (2014)
  • 著者名/発表者名: Kuroda M.
  • 学会等名: 26th EORTC-NCI-ACR Symposium.
  • 発表場所: Barcelona, SPAIN
  • 年月日: 2014-11-18 – 2014-11-21
• [学会発表] 肺がんを効果的に抑制するMimic microRNAの新規形状の探索. (2014)
  • 著者名/発表者名: 大野慎一郎、板野華蓮、原田裕一郎、高梨正勝、須藤カツ子、池田徳彦、黒田雅彦.
  • 学会等名: 第55回日本肺癌学会学術集会
  • 発表場所: 京都
  • 年月日: 2014-11-14 – 2014-11-16
• [学会発表] エクソソームによるドラッグデリバリーシステムの応用 (2014)
  • 著者名/発表者名: 黒田雅彦、高梨正勝、大野慎一郎.
  • 学会等名: 第6回日本RNAi研究会(JARI)、 第1回日本細胞外小胞学会(JSEV).
  • 発表場所: 広島
  • 年月日: 2014-08-28 – 2014-08-30
• [学会発表] 浸潤性乳癌組織中に認めるhsa-let-7d発現細胞の出現意義について. (2014)
  • 著者名/発表者名: 藤田浩司、原田裕一郎、黒田雅彦.
  • 学会等名: 第11回日本病理学会カンファレンス
  • 発表場所: 六甲山
  • 年月日: 2014-08-01 – 2014-08-02
• [学会発表] がんを効果的に抑制する短縮型Mimic microRNA の開発. (2014)
  • 著者名/発表者名: 大野慎一郎、板野華蓮、原田裕一郎、高梨正勝、須藤カツ子、黒田雅彦.
  • 学会等名: 第33回分子病理学研究会
  • 発表場所: 宮城
  • 年月日: 2014-07-25 – 2014-07-26
• [学会発表] Colon cancer stem cells and microRNA signature during cokon cancer development. (2014)
  • 著者名/発表者名: Kuroda M.
  • 学会等名: 2nd International Symposium 2014
  • 発表場所: Seoul, KOREA.
  • 年月日: 2014-07-07 – 2014-07-07
  • 招待講演
• [学会発表] 自己由細胞由来のエクソソームによるドラッグデリバリーシステムへの応用. (2014)
  • 著者名/発表者名: 高梨 正勝、上田 しのぶ、須藤 カツ子、石川 章夫、黒田 雅彦.
  • 学会等名: 第103回日本病理学会総会
  • 発表場所: 広島
  • 年月日: 2014-04-24 – 2014-04-26