新規蛋白尿惹起因子の同定と臨床検査診断法への応用

2013 年度 実施状況報告書

• 研究課題/領域番号: 25670269
• 研究種目: 挑戦的萌芽研究
• 研究機関: 金沢大学
• 研究代表者: 和田 隆志 金沢大学, 医学系, 教授 (40334784)
• 研究期間 (年度): 2013-04-01 – 2015-03-31
• キーワード: 蛋白尿 / ネフローゼ症候群 / オミクス / プロテオーム / 透過性因子 / バイオマーカー

研究概要

病因を問わずあらゆる腎臓病において、蛋白尿は腎機能低下、全死亡率ならびに心血管系死亡率と密接に関連する。そのため、蛋白尿の出現機序に関連する分子の同定、その診断・治療反応性・予後を反映するバイオマーカー確立は腎臓病の予後改善にむけて重要な課題である。しかしながら、蛋白尿を惹起する透過性因子はいまだ国際的に明らかではない。
本研究の目的は、オミクス技術を用いてネフローゼ症候群患者の血清中における糸球体透過性制御因子の探索を行うことである。このことにより、腎生検による侵襲的な検査によったこれまでの腎臓病の診断が新規の臨床検査診断法開発につながる可能性がある。さらに、蛋白尿をきたす糸球体障害の質的診断に加えて、透過性因子測定により、治療効果判定やネフローゼ症候群の予後を明らかにできる可能性がある。これまでの検討により、特発性ネフローゼ症候群のうち、巣状分節性糸球体硬化症および微小変化型ネフローゼ症候群の蛋白尿の出現、病勢と相関性の高い因子を抽出している。このうち、用いたチップで検出された血清中のペプチド発現と上記臨床パラメータとの相関を検討したところ、相関係数0.8以上を呈したペチドが数個みられた。興味深いことに、蛋白尿との相関係数-0.8以下、すなわち蛋白尿と逆相関するペプチドもみられた。これらのペプチドと臨床的な蛋白尿の極期、寛解時の変化との相関が強いものを選択し、その解析を進めている。

現在までの達成度 (区分)

2: おおむね順調に進展している

理由

本研究では３つの特徴的なアイデアが盛り込まれている。①白血球除去療法や移植後再発例に対するリツキシマブで寛解に至り、蛋白尿惹起因子の存在が強く疑われる症例を対象としていること、②プロテオミクス解析とトランスクリプトーム解析の二重評価などオミクス解析に工夫をしていること、③対象となるペプチドの分子量設定の工夫をしていることである。実際、これらの利点をふまえて、白血球除去療法などで改善した症例からの蛋白尿惹起因子の解析が進んでいる。トランスクリプトーム解析技術、その結果を理解するバイオインフォマティクス技術も確立しつつある。今後、プロテオミクスとトランスクリプトーム組み合わせによるオミクス解析ならびにインフォマティクスの工夫から新規分子の同定を進めていきたいと考えている。これにより、臨床的に蛋白尿が予後とかかわる腎臓病、ことにネフローゼ症候群などの症の診断、予後ならびに治療反応性の判定に用い、診断と治療の水準向上につなげたいと考えている。

今後の研究の推進方策

候補蛋白に関して、クロマト分画を還元状態とした後にプロテアーゼ消化による断片化を行いプロテインチップMS/MS（インターフェイス使用）を行う。そのうえで、Mascotでのデータベース検索によるアミノ酸配列解析を行う予定である。あわせて、新規の蛋白候補も並行して検討する予定にしている。また、次世代シーケンサーにより候補蛋白の遺伝子発現との相関も検討し始めている。このように、候補蛋白の精製を進めるとともに、同じ患者の白血球によるトランスクリプトーム解析により既知蛋白の発現を裏付け、絞り込むことを予定する。これらの標的因子の同定・絞り込みが終了した時点で、臨床的意義の解析ならびに臨床検査診断法の確立を検討することを予定している。これまでに、既知の蛋白発現により、同じネフローゼ症候群を示す例であっても、背景疾患による鑑別が可能であることを見いだしてきた。このため新規蛋白の同定とともに、パネル化による臨床検査法としての有用性の検証を順次進めていく予定である。最終的に蛋白測定条件を至適化し、新規臨床検査診断法を確立し臨床に還元することを目標とする。さらに、学会等での密接な交流、調査研究、成果発表などを行い本研究を発展させる。

研究成果

• [雑誌論文] Clinical impact of albuminuria and glomerular filtration rate on renal and cardiovascular events, and all-cause mortality in Japanese patients with type 2 diabetes. (2014)
  • 著者名/発表者名: Wada T, Haneda M, Furuichi K, Babazono T, Yokoyama H, Iseki K, Araki SI, Ninomiya T, Hara S, Suzuki Y, Iwano M, Kusano E, Moriya T, Satoh H, Nakamura H, Shimizu M, Toyama T, Hara A, Makino H; The Research Group of Diabetic Nephropathy, Ministry of Health, Labour, and Welfare of Japan.
  • 雑誌名: Clin Exp Nephrol 巻: - ページ: 印刷中
  • DOI: 10.1007/s10157-013-0879-4
  • 査読あり
• [雑誌論文] Kidney lesions in diabetic patients with normoalbuminuric renal insufficiency. (2014)
  • 著者名/発表者名: Shimizu M, Furuichi K, Yokoyama H, Toyama T, Iwata Y, Sakai N, Kaneko S, Wada T.
  • 雑誌名: Clin Exp Nephrol 巻: 18 ページ: 305-312
  • DOI: 10.1007/s10157-013-0870-0
  • 査読あり
• [雑誌論文] Treatment and impact of dyslipidemia in diabetic nephropathy. (2014)
  • 著者名/発表者名: Toyama T, Shimizu M, Furuichi K, Kaneko S, Wada T.
  • 雑誌名: Clin Exp Nephrol 巻: 18 ページ: 201-205
  • DOI: 10.1007/s10157-013-0898-1
  • 査読あり
• [雑誌論文] Pro-inflammatory/Th1 gene expression shift in high glucose stimulated mesangial cells and tubular epithelial cells. (2014)
  • 著者名/発表者名: Iwata Y, Furuichi K, Hashimoto S, Yokota K, Yasuda H, Sakai N, Kitajima S, Toyama T, Shinozaki Y, Sagara A, Matsushima K, Kaneko S, Wada T.
  • 雑誌名: Biochem Biophys Res Commun 巻: 443 ページ: 969-974
  • DOI: 10.1016/j.bbrc.2013.12.072
  • 査読あり
• [雑誌論文] Impact of kidney function and urinary protein excretion on pulmonary function in Japanese patients with chronic kidney disease. (2014)
  • 著者名/発表者名: Nakade Y, Toyama T, Furuichi K, Kitajima S, Ohkura N, Sagara A, Shinozaki Y, Hara A, Kitagawa K, Shimizu M, Iwata Y, Oe H, Nagahara M, Horita H, Sakai Y, Kaneko S, Wada T.
  • 雑誌名: Clin Exp Nephrol 巻: - ページ: 印刷中
  • DOI: 10.1007/s10157-013-0920-7
  • 査読あり
• [雑誌論文] Coordinated changes in DNA methylation in antigen-specific memory CD4 T cells. (2013)
  • 著者名/発表者名: Hashimoto S, Ogoshi K, Sasaki A, Abe J, Qu W, Nakatani Y, Ahsan B, Oshima K, Shand FH, Ametani A, Suzuki Y, Kaneko S, Wada T, Hattori M, Sugano S, Morishita S, Matsushima K.
  • 雑誌名: J Immunol 巻: 190 ページ: 4076-4091
  • DOI: 10.4049/jimmunol.1202267
  • 査読あり
• [雑誌論文] ER stress induced impaired TLR signaling and macrophage differentiation of human monocytes. (2013)
  • 著者名/発表者名: Komura T, Sakai Y, Honda M, Takamura T, Wada T, Kaneko S.
  • 雑誌名: Cell Immunol 巻: 282 ページ: 44-52
  • DOI: 10.1016/j.cellimm.2013.04.006
  • 査読あり
• [雑誌論文] LPA1-induced cytoskeleton reorganization drives fibrosis through CTGF-dependent fibroblast proliferation. (2013)
  • 著者名/発表者名: Sakai N, Chun J, Duffield JS, Wada T, Luster AD, Tager AM.
  • 雑誌名: FASEB J 巻: 27 ページ: 1830-1846
  • DOI: 10.1096/fj.12-219378
  • 査読あり
• [雑誌論文] The impacts of albuminuria and low eGFR on the risk of cardiovascular death, all-cause mortality, and renal events in diabetic patients: meta-analysis. (2013)
  • 著者名/発表者名: Toyama T, Furuichi K, Ninomiya T, Shimizu M, Hara A, Iwata Y, Kaneko S, Wada T.
  • 雑誌名: PLoS ONE 巻: 8 ページ: e71810
  • DOI: 10.1371/journal.pone.0071810
  • 査読あり
• [雑誌論文] Adipose tissue-derived stem cells as a regenerative therapy for a murine steatohepatitis-induced cirrhosis model. (2013)
  • 著者名/発表者名: Seki A, Sakai Y, Komura T, Nasti A, Yoshida K, Higashimoto M, Honda M, Usui S, Takamura M, Takamura T, Ochiya T, Furuichi K, Wada T, Kaneko S.
  • 雑誌名: Hepatology 巻: 58 ページ: 1133-1142
  • DOI: 10.1002/hep.26470
  • 査読あり
• [雑誌論文] Long-term outcomes of Japanese type 2 diabetic patients with biopsy-proven diabetic nephropathy. (2013)
  • 著者名/発表者名: Shimizu M, Furuichi K, Toyama T, Kitajima S, Hara A, Kitagawa K, Iwata Y, Sakai N, Takamura T, Yoshimura M, Yokoyama H, Kaneko S, Wada T and Kanazawa Study Group for Renal Diseases and Hypertension.
  • 雑誌名: Diabetes Care 巻: 36 ページ: 3655-3662
  • DOI: 10.2337/dc13-0298
  • 査読あり
• [雑誌論文] CCL2/CCR2 augments the production of transforming growth factor-beta1, type 1 collagen and CCL2 by human CD45-/collagen 1-positive cells under high glucose concentrations. (2013)
  • 著者名/発表者名: Hara A, Sakai N, Furuichi K, Sakai Y, Takeya M, Bucala R, Mukaida N, Takuwa Y, Matsushima K, Kaneko S, Wada T.
  • 雑誌名: Clin Exp Nephrol 巻: 17 ページ: 793-804
  • DOI: 10.1007/s10157-013-0796-6
  • 査読あり
• [雑誌論文] Long-term observations of clinicopathological characteristics and outcome of Japanese patients with pauci-immune crescentic glomerulonephritis. (2013)
  • 著者名/発表者名: Kitagawa K, Furuichi K, Shinozaki Y, Toyama T, Kitajima S, Hara A, Iwata Y, Sakai N, Kaneko S, Wada T; Kanazawa Study Group for Renal Diseases and Hypertension.
  • 雑誌名: Clin Exp Nephrol 巻: 17 ページ: 858-865
  • DOI: 10.1007/s10157-013-0798-4
  • 査読あり
• [雑誌論文] Japan Diabetic Nephropathy Cohort Study: study design, methods, and implementation. (2013)
  • 著者名/発表者名: Furuichi K, Shimizu M, Toyama T, Koya D, Koshino Y, Abe H, Mori K, Satoh H, Imanishi M, Iwano M, Yamauchi H, Kusano E, Fujimoto S, Suzuki Y, Okuda S, Kitagawa K, Iwata Y, Kaneko S, Nishi S, Yokoyama H, Ueda Y, Haneda M, Makino H, Wada T.
  • 雑誌名: Clin Exp Nephrol 巻: 17 ページ: 819-826
  • DOI: 10.1007/s10157-013-0778-8
  • 査読あり
• [雑誌論文] Validation of a newly proposed histopathological classification in Japanese patients with anti-neutrophil cytoplasmic antibody-associated glomerulonephritis. (2013)
  • 著者名/発表者名: Iwakiri T, Fujimoto S, Kitagawa K, Furuichi K, Yamahana J, Matsuura Y, Yamashita A, Uezono S, Shimao Y, Hisanaga S, Tokura T, Wada T, Kitamura K, Asada Y.
  • 雑誌名: BMC Nephrol 巻: 14 ページ: 125
  • DOI: 10.1186/1471-2369-14-125
  • 査読あり
• [雑誌論文] Adipose tissue derived stromal stem cell therapy in murine ConA-derived hepatitis is dependent on myeloid-lineage and CD4+ T-cell suppression. (2013)
  • 著者名/発表者名: Higashimoto M, Sakai Y, Takamura M, Usui S, Nasti A, Yoshida K, Seki A, Komura T, Honda M, Wada T, Furuichi K, Ochiya T, Kaneko S.
  • 雑誌名: Eur J Immunol 巻: 43 ページ: 2956-2968
  • DOI: 10.1002/eji.201343531
  • 査読あり
• [雑誌論文] Clinical findings on ANCA-associated renal vasculitis from the Japan RPGN registry obtained via a questionnaire survey. (2013)
  • 著者名/発表者名: Yamagata K, Usui J, Sugiyama H, Nitta K, Wada T, Muso E, Arimura Y, Koyama A, Makino H, Matsuo S.
  • 雑誌名: Clin Exp Nephrol 巻: 17 ページ: 646-651
  • DOI: 10.1007/s10157-012-0740-1
  • 査読あり
• [学会発表] 抗糸球体基底膜抗体型腎炎の臨床病理学的所見と予後に関する検討 (2014)
  • 著者名/発表者名: 小倉央行・相良明宏・篠崎康之・北島信二・遠山直志・山端潤也・北川清樹・清水和朗・岩田恭宜・坂井宣彦・清水美保・古市賢吾・和田隆志
  • 学会等名: 第58回日本リウマチ学会総会・学術集会
  • 発表場所: グランドプリンスホテル新高輪
  • 年月日: 20140426-20140426
• [学会発表] Outcome and its related risk factors in Japanese patients with diabetic nephropathy. (2014)
  • 著者名/発表者名: Takashi Wada
  • 学会等名: The 3rd Chronic Kidney Disease Frontier Meeting in Nagoya, Japan
  • 発表場所: The Castle Plaza hotel
  • 年月日: 20140222-20140222
  • 招待講演
• [学会発表] ネフローゼ症候群に対するLCAPの有用性 (2013)
  • 著者名/発表者名: 古市賢吾・和田隆志
  • 学会等名: 第34回日本アフェレシス学会学術大会
  • 発表場所: 軽井沢プリンスホテルウエスト
  • 年月日: 20131103-20131103
• [学会発表] 関節リウマチ治療におけるバイオ製剤とアフェレシス (2013)
  • 著者名/発表者名: 遠山直志・古市賢吾・和田隆志
  • 学会等名: 第34回日本アフェレシス学会学術大会
  • 発表場所: 軽井沢プリンスホテルウエスト
  • 年月日: 20131102-20131102
• [学会発表] 糖尿病性腎症と高血圧：病態と治療 (2013)
  • 著者名/発表者名: 和田隆志
  • 学会等名: 第43回日本腎臓学会西部学術大会
  • 発表場所: 松山全日空ホテル
  • 年月日: 20131011-20131011
  • 招待講演
• [学会発表] 糖尿病性腎症における炎症の意義とその制御 (2013)
  • 著者名/発表者名: 和田隆志
  • 学会等名: 第28回日本糖尿病合併症学会
  • 発表場所: 旭川グランドホテル
  • 年月日: 20130913-20130913
  • 招待講演
• [学会発表] 糖尿病性腎症レジストリーJapan Diabetic Nephropathy Chhort Study(JDNCS)の集積と展開 (2013)
  • 著者名/発表者名: 古市賢吾・舟本智章・北島信治・遠山直志・北川清樹・岩田恭宜・清水美保・和田隆志
  • 学会等名: 第28回日本糖尿病合併症学会
  • 発表場所: 旭川グランドホテル
  • 年月日: 20130913-20130913
• [学会発表] 臨床化学が拓く新たな慢性腎臓病の研究と診療 (2013)
  • 著者名/発表者名: 和田隆志
  • 学会等名: 第53回日本臨床化学会年次学術集会
  • 発表場所: あわぎんホール（徳島）
  • 年月日: 20130901-20130901
  • 招待講演
• [学会発表] Dyslipidemia and kidney injury in patients with type 2 diabetes. (2013)
  • 著者名/発表者名: Tadashi Toyama, Kengo Furuichi, Miho Shimizu, Yasunori Iwata, Norihiko Sakai, Shuichi Kaneko, Takashi Wada.
  • 学会等名: ISN World Congress of Nephrology 2013 Satellite Symposium "Kidney and Lipids"
  • 発表場所: Hilton Fukuoka Sea Hawk
  • 年月日: 20130605-20130605
• [学会発表] 糖尿病性腎症-基礎と臨床- (2013)
  • 著者名/発表者名: 和田隆志
  • 学会等名: 第56回日本腎臓学会学術総会
  • 発表場所: 東京国際フォーラム
  • 年月日: 20130512-20130512
  • 招待講演
• [学会発表] 糖尿病性腎症ならびに腎硬化症の診療水準向上と重症化防止にむけた調査研究 (2013)
  • 著者名/発表者名: 和田隆志
  • 学会等名: 第56回日本腎臓学会学術総会
  • 発表場所: 東京国際フォーラム
  • 年月日: 20130512-20130512
  • 招待講演
• [学会発表] 高糖刺激下での培養メサンギウム細胞における炎症関連遺伝子発現 (2013)
  • 著者名/発表者名: 岩田恭宜・橋本真一・横田恭宣・古市賢吾・和田隆志
  • 学会等名: 第56回日本腎臓学会学術総会
  • 発表場所: 東京国際フォーラム
  • 年月日: 20130511-20130511
• [学会発表] 抗糸球体基底膜抗体型腎炎の臨床病理学的所見と予後に関する検討 (2013)
  • 著者名/発表者名: 小倉央行・相良明宏・北島信治・遠山直志・北川清樹・岩田恭宜・清水美保・古市賢吾・和田隆志
  • 学会等名: 第57回日本リウマチ学会総会・学術集会
  • 発表場所: 国立京都国際会館
  • 年月日: 20130420-20130420
• [学会発表] ループス腎炎におけるCSF-1と免疫抑制性骨髄由来細胞の役割 (2013)
  • 著者名/発表者名: 岩田恭宜・古市賢吾・和田隆志
  • 学会等名: 第57回日本リウマチ学会総会・学術集会
  • 発表場所: 国立京都国際会館
  • 年月日: 20130418-20130418
• [図書] 今日の治療指針 2014 (2014)
  • 著者名/発表者名: 和田隆志
  • 総ページ数: 1900(559-561)
  • 出版者: 医学書院
• [図書] ワンランク上の検査値の読み方・考え方 第2版 (2014)
  • 著者名/発表者名: 北川清樹・和田隆志
  • 総ページ数: 257(196-202)
  • 出版者: 総合医学社
• [図書] 系統看護学講座 別巻 臨床検査（第7版） (2014)
  • 著者名/発表者名: 和田隆志
  • 総ページ数: 356(143-166)
  • 出版者: 医学書院
• [図書] Annual Review 腎臓 (2014)
  • 著者名/発表者名: 古市賢吾・和田隆志
  • 総ページ数: 294(47-52)
  • 出版者: 中外医学社
• [図書] 腎疾患・透析 最新の治療 2014-2016 (2014)
  • 著者名/発表者名: 遠山直志・和田隆志
  • 総ページ数: 430(175-177)
  • 出版者: 南江堂
• [図書] year note TOPICS 2014-2015 4th edition (2014)
  • 著者名/発表者名: 北川清樹・和田隆志
  • 総ページ数: 3104(183-188)
  • 出版者: メディックメディア
• [図書] year note TOPICS 2013-2014 3rd edition (2013)
  • 著者名/発表者名: 北川清樹・和田隆志
  • 総ページ数: 3088(177-181)
  • 出版者: メディックメディア
• [図書] 内科処方実践マニュアル 使い分けとさじ加減 (2013)
  • 著者名/発表者名: 岩田恭宜・和田隆志
  • 総ページ数: 552(265-274)
  • 出版者: 日本医学出版
• [図書] 検査診断学への展望 -臨床検査指針：測定とデータ判読のポイント- (2013)
  • 著者名/発表者名: 堀田宏・和田隆志
  • 総ページ数: 713(627-633)
  • 出版者: 南江堂
• [図書] 腎不全治療レシピ (2013)
  • 著者名/発表者名: 岩田恭宜・和田隆志
  • 総ページ数: 304(52-61)
  • 出版者: 医学出版
• [図書] 透析患者の検査値の読み方 改訂第3版 (2013)
  • 著者名/発表者名: 北川清樹・和田隆志
  • 総ページ数: 460(60-62)
  • 出版者: 日本メディカルセンター
• [図書] 透析患者の検査値の読み方 改訂第3版 (2013)
  • 著者名/発表者名: 古市賢吾・和田隆志
  • 総ページ数: 460(63-65)
  • 出版者: 日本メディカルセンター
• [図書] 透析患者の検査値の読み方 改訂第3版 (2013)
  • 著者名/発表者名: 北島信治・和田隆志
  • 総ページ数: 460(66-67)
  • 出版者: 日本メディカルセンター
• [図書] 認定医・専門医のための輸液・電解質・酸塩基平衡 (2013)
  • 著者名/発表者名: 北川清樹・和田隆志
  • 総ページ数: 256(45-49)
  • 出版者: 中山書店
• [図書] 内科学 第10版 (2013)
  • 著者名/発表者名: 和田隆志
  • 総ページ数: 2872(1524-1526)
  • 出版者: 朝倉書店
• [図書] 最新医学別冊 新しい診断と治療のABC80 ネフローゼ症候群 (2013)
  • 著者名/発表者名: 山端潤也・古市賢吾・和田隆志
  • 総ページ数: 268(94-98)
  • 出版者: 最新医学社
• [産業財産権] 急性腎障害の予後予測方法 (2013)
  • 発明者名: 古市賢吾、和田隆志
  • 権利者名: 金沢大学
  • 産業財産権種類: 特許
  • 産業財産権番号: 特許出願 2013-120285
  • 出願年月日: 2013-06-06