臨床検体を用いたRNAiスクリーニングによる骨髄異形成症候群進展機序の網羅的解析

2013 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 25670445
• 研究機関: 東京大学
• 研究代表者: 黒川 峰夫 東京大学, 医学部附属病院, 教授 (80312320)
• 研究期間 (年度): 2013-04-01 – 2014-03-31
• キーワード: 骨髄異形成症候群 / 治療抵抗性 / RNAiスクリーニング / 網羅的ゲノム解析

研究概要

骨髄異形成症候群(MDS)の病態進展・治療抵抗性の分子機序を明らかにするため、ヒトMDS臨床検体および骨髄性腫瘍細胞株を用いたRNAiスクリーニングを行った。まずヒトMDS臨床検体にレンチウィルスを用いてDECIPHER shライブラリーを遺伝子導入し、培養後に割合が増加するようなshRNAを同定しようと試みたが、有意な遺伝子は検出されなかった。そこでヒト骨髄性腫瘍細胞株に同様の方法でshライブラリーを遺伝子導入し、高リスクMDSで唯一生存期間を延長することが知られている治療薬である5-アザシチジン存在下で培養し、遺伝子導入直後、および10日間、30日間培養後の細胞からゲノムを抽出し、各shRNAコンストラクトに特異的なバーコード配列を次世代シーケンサーで検出した。各時点での比較、および薬剤非存在下での培養条件との比較により、5-アザシジチン存在下で有意に増幅するような遺伝子の同定を試みた。その機能喪失がMDSの病態進展・治療抵抗性に関わるような遺伝子として、Aキナーゼアンカー蛋白遺伝子(癌抑制遺伝子であり高メチル化による抑制が星状細胞腫や多発性骨髄腫で認められる)、細胞周期チェックポイント関連遺伝子などを抽出し得た。
現在ヒトMDS細胞株を用いてこれらの遺伝子の導入およびノックダウンを行い、MDSにおいて治療抵抗性を惹起する分子機序をin vitroでさらに詳しく解析中である。さらにこれらの遺伝子のMDSの治療抵抗性との関連性を臨床検体で検証するため、同一MDS症例の経時的に採取された臨床検体を用いて、これらの遺伝子の変異の検索、および全エクソンシーケンスによるclonal evolutionの解析を行っており、MDSの治療抵抗性メカニズムの解明を多方面から進めている。

研究成果

• [雑誌論文] Pulmonary lymphocyte-rich classical Hodgkin lymphoma with early response to ABVD therapy. (2014)
  • 著者名/発表者名: Honda A, Nakamura F, Nannya Y, Shintani Y, Fukayama M, Ichikawa M, and Kurokawa M.
  • 雑誌名: Annals of Hematology 巻: 93 ページ: 1073-1074
  • DOI: 10.1007/s00277-013-1935-6
  • 査読あり
• [雑誌論文] NF-κB/TNF-α positive feedback loop with active proteasome machinery supports myeloid leukemia initiating cell capacity. (2014)
  • 著者名/発表者名: Kagoya Y, Yoshimi A, Kataoka K, Nakagawa M, Kumano K, Arai S, Kobayashi H, Saito T, Iwakura Y, and Kurokawa M.
  • 雑誌名: Journal of Clinical Investigation 巻: 124 ページ: 528-542
  • DOI: 10.1172/JCI68101
  • 査読あり
• [雑誌論文] Catheter-related septic shock by Micrococcus in an autologous hematopoietic stem cell transplantation recipient. (2014)
  • 著者名/発表者名: Kogure Y, Nakamura F, Nukina A, Kamikubo Y, Ichikawa M, Kurokawa M, Kamikubo Y, and Kurokawa M.
  • 雑誌名: American Journal of Infection Control 巻: 42 ページ: 87
  • DOI: 10.1016/j.ajic.2013.07.010.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Distribution of serum erythropoietin levels in lower risk myelodysplastic syndrome cases with anemia. (2014)
  • 著者名/発表者名: Nakazaki K, Nannya Y, and Kurokawa M.
  • 雑誌名: International Journal of Hematology 巻: 99 ページ: 53-56
  • DOI: 10.1007/s12185-013-1485-7
  • 査読あり
• [雑誌論文] Serial Profile of Vitamins and Trace Elements during the Acute Phase of Allogeneic Stem Cell Transplantation. (2014)
  • 著者名/発表者名: Nannya Y, Shinohara A, Ichikawa M, and Kurokawa M.
  • 雑誌名: Biology of Blood and Marrow Transplantation 巻: 20 ページ: 430-434
  • DOI: 10.1016/j.bbmt.2013.12.554
  • 査読あり
• [雑誌論文] Single-cell gene expression analysis reveals clonal architecture of blast-phase chronic myeloid leukaemia. (2014)
  • 著者名/発表者名: Nukina A, Kagoya Y, Watanabe-Okochi N, Arai S, Ueda K, Yoshimi A, Nannya Y, and Kurokawa M.
  • 雑誌名: British Journal of Haematology 巻: 165 ページ: 414-416
  • DOI: 10.1111/bjh.12726
  • 査読あり
• [雑誌論文] A mixed-type autoimmune hemolytic anemia with immune thrombocytopenia related with myositis and post-transplantation lymphoproliferative disorder. (2014)
  • 著者名/発表者名: Ogura M, Ichikawa M, Masuda A, Kandabashi K, Nannya Y, and Kurokawa M.
  • 雑誌名: Annals of Hematology 巻: 93 ページ: 869-871
  • DOI: 10.1007/s00277-013-1887-x
  • 査読あり
• [雑誌論文] Development of hairy cell leukemia in familial platelet disorder with predisposition to acute myeloid leukemia. (2014)
  • 著者名/発表者名: Toya T, Yoshimi A, Morioka T, Arai S, Ichikawa M, Usuki K, Kurokawa M.
  • 雑誌名: Platelets 巻: 25 ページ: 300-302
  • DOI: 10.3109/09537104.2013.818636
  • 査読あり
• [雑誌論文] MALT lymphoma of the small bowel with protein-losing enteropathy. (2014)
  • 著者名/発表者名: Tsukamoto A, Nakamura F, Nannya Y, Kobayashi Y, Shibahara J, Ichikawa M, Fukayama M, Koike K, and Kurokawa M.
  • 雑誌名: International Journal of Hematology 巻: 99 ページ: 198-201
  • DOI: 10.1007/s12185-013-1492-8
  • 査読あり
• [雑誌論文] Intracellular reactive oxygen species mark and influence the megakaryocyte-erythrocyte progenitor fate of common myeloid progenitors. (2013)
  • 著者名/発表者名: Shinohara A, Imai Y, Nakagawa M, Takahashi T, Ichikawa M, and Kurokawa M.
  • 雑誌名: Stem Cells 巻: 32 ページ: 548-557
  • DOI: 10.1002/stem.1588
  • 査読あり
• [雑誌論文] Transcription factor RUNX1 promotes survival of acute myeloid leukemia cells. (2013)
  • 著者名/発表者名: Goyama S, Schibler J, Cunningham L, Zhang Y, Rao Y, Nishimoto N, Nakagawa M, Olsson A, Wunderlich M, Link KA, Mizukawa B, Grimes HL, Kurokawa M, Liu PP, Huang G, and Mulloy JC.
  • 雑誌名: Journal of Clinical Investigation 巻: 123 ページ: 3876-88
  • DOI: 10.1172/JCI68557
  • 査読あり
• [雑誌論文] A role for RUNX1 in hematopoiesis and myeloid leukemia. (2013)
  • 著者名/発表者名: Ichikawa M, Yoshimi A, Nakagawa M, Nishimoto N, Watanabe-Okochi N, and Kurokawa M.
  • 雑誌名: International Journal of Hematology 巻: 97 ページ: 726-34
  • DOI: 10.1007/s12185-013-1347-3
  • 査読あり
• [雑誌論文] Acute myeloid leukemia with cryptic CBFB-MYH11 type D. (2013)
  • 著者名/発表者名: Kobayashi T, Ichikawa M, Kamikubo Y, and Kurokawa M.
  • 雑誌名: International Journal of Clinical and Experimental Pathology 巻: 6 ページ: 110-112
  • 査読あり
• [雑誌論文] The effect of decreased-dose idarubicin for elderly patients with acute myeloid leukemia. (2013)
  • 著者名/発表者名: Kobayashi T, Ichikawa M, Nannya Y, and Kurokawa M.
  • 雑誌名: Japanese Journal of Clinical Oncology 巻: 43 ページ: 1047-1051
  • DOI: 10.1093/jjco/hyt111
  • 査読あり
• [雑誌論文] Generation of iPS cells from normal and malignant hematopoietic cells. (2013)
  • 著者名/発表者名: Kumano K, Arai S, and Kurokawa M.
  • 雑誌名: International Journal of Hematology 巻: 98 ページ: 145-152
  • DOI: 10.1007/s12185-013-1385-x
  • 査読あり
• [雑誌論文] Moxifloxacin is more effective than tosufloxacin in reducing chemotherapy-induced febrile neutropneia in patients with hematological malignancies. (2013)
  • 著者名/発表者名: Shinohara A, Yoshiki Y, Masamoto Y, Hangaishi A, Nannya Y, and Kurokawa M.
  • 雑誌名: Leukemia Lymphoma 巻: 54 ページ: 794-798
  • DOI: 10.3109/10428194.2012.725848
  • 査読あり
• [雑誌論文] Simultaneous increase in 1,3-β-D-glucan and procalcitonin levels in Pseudomonas aeruginosa infection. (2013)
  • 著者名/発表者名: Koya J, Nannya Y, Kobayashi H, Okugawa S, Moriya K, and Kurokawa M.
  • 雑誌名: Journal of Infection 巻: 67 ページ: 164-166
  • DOI: 10.1016/j.jinf.2013.03.017
  • 査読あり
• [雑誌論文] Simple but powerful prognostic scoring model for MALT lymphoma: a retrospective study. (2013)
  • 著者名/発表者名: Morita K, Nannya Y, Yoshizato T, and Kurokawa M.
  • 雑誌名: Annals of Hematology 巻: 92 ページ: 421-423
  • DOI: 10.1007/s00277-012-1585-0
  • 査読あり
• [雑誌論文] Unique association of Waldenstrom macroglobulinemia with optic neuritis and monoclonal T cell expansion. (2013)
  • 著者名/発表者名: Morita K, Yoshimi A, Masuda A, Ichikawa M, Yatomi Y, and Kurokawa M.
  • 雑誌名: International Journal of Hematology 巻: 98 ページ: 247-249
  • DOI: 10.1007/s12185-013-1372-2
  • 査読あり
• [雑誌論文] A case of Schizophyllum commune sinusitis following unrelated cord blood transplantation for acute lymphoblastic leukemia. (2013)
  • 著者名/発表者名: Toya T, Shinohara A, Tatsuno K, Seo S, Nannya Y, Ichikawa M, Makimura K, Moriya K, and Kurokawa M.
  • 雑誌名: International Journal of Hematology 巻: 98 ページ: 261-263
  • DOI: 10.1007/s12185-013-1362-4
  • 査読あり
• [雑誌論文] Successful treatment with recombinant thrombomodulin for B-cell lymphoma-associated hemophagocytic syndrome complicated by disseminated intravascular coagulation. (2013)
  • 著者名/発表者名: Uni M, Yoshimi A, Maki H, Maeda D, Nakazaki K, Nakamura F, Fukayama M, and Kurokawa M.
  • 雑誌名: International Journal of Clinical and Experimental Pathology 巻: 6 ページ: 1190-1194
  • 査読あり
• [雑誌論文] Transformation of follicular lymphoma in the retroperitoneal muscles demonstrated by CT-guided needle biopsy of FDG-avid lesions; case series. (2013)
  • 著者名/発表者名: Uni M, Nakamura F, Yoshimi A, Shinozaki-Ushiku A, Hosoi A, Nakazaki K, Nannya Y, Fukayama M, and Kurokawa M
  • 雑誌名: International Journal of Clinical and Experimental Pathology 巻: 7 ページ: 402-406
  • 査読あり