AIRE研究を基盤とした新たな自己抗原(DI)に対する自己抗体の臨床的意義

2014 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 25670461
• 研究機関: 九州大学
• 研究代表者: 永淵 正法 九州大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (00150441)
• 研究期間 (年度): 2013-04-01 – 2015-03-31
• キーワード: 自己免疫調節遺伝子 / Disulfide Isomerase / 自己抗体

研究実績の概要

【方法】患者血清を用いた大規模スクリーニングを実施。作成したDisulfide Isomerase (DI)抗原を10ng/lane用い、10%ポリアクリルアミドゲルのSDS-PAGEを実施。さらに、PVDF膜へ転写し、これに一次抗体として、患者プール血清を用いて反応させた。この際、1検体あたりの血清量は5μlとし、各疾患毎にプール血清を作成。その後、希釈倍率を合わせた（1検体あたり×400希釈相当）。なお、この時の疾患群として、自己免疫性膵炎、ブドウ膜炎、慢性胃炎（抗胃壁細胞抗体+）、慢性胃炎、GVHD、原発性胆汁性肝硬変、シェーグレン症候群、橋本病を合計200例程度選択した。二次抗体には、Amersham ECL Anti-Human IgG, Horse radish peroxidase-linked species-specific whole Antibodyを×10,000希釈にて使用した。
【結果】今回の実験条件では、スクリーニングは全例陰性という結果となった。用いた一次抗体がプール血清の状態であるため、一次抗体としての血清量（もしくは抗体力価）が不足、もしくは抗原としてのDI量が不足が考えられる。対処策としては、これらのWestern blottingの条件設定の改善もしくは、Dot Blot法へスクリーニング方法を変更することも検討すべきだと考えられる。さらにこの結果をうけて、高感度検出法であるELISAの検査系確立の重要性が認識されたため、この検査系の開発に取り組んでいる。

研究成果

• [雑誌論文] Reduced Tyk2 gene expression in β-cells due to natural mutation determines susceptibility to virus-induced diabetes. (2015)
  • 著者名/発表者名: Izumi K, Mine K, Inoue Y, Teshima M, Ogawa S, Kai K, Kurafuji T, Hirakawa K, Miyakawa D, Ikeda H, Inada A, Hara M, Yamada H, Akashi K, Niho Y, Ina K, Kobayashi T, Yoshikai Y, Anzai K, Yamashita T, Minagawa H, Fujimoto S, Kurisaki H, Shimoda K, Katsuta H, Nagafuchi S.
  • 雑誌名: Nature Communications 巻: 6 ページ: e6748,
  • DOI: 10.1038/ncomms7748
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] TYK2 promoter variant and diabetes mellitus in the Japanese. (2015)
  • 著者名/発表者名: Nagafuchi S, Kamada Y, Hirakawa K , Tsutsu N, eet al.
  • 雑誌名: EBioMedicine 巻: 2 ページ: in press
  • DOI: 10.1016/j.ebiom.2015.004
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Suppression of Th1-mediated autoimmunity by embryonic stem cell-derived dendritic cells. (2014)
  • 著者名/発表者名: Ikeda T, Hirata S, Takamatsu K, Haruta M, Tsukamoto H, Ito T, Uchino M, Ando Y, Nagafuchi S, Nishimura Y, Senju S.
  • 雑誌名: PLos One 巻: 9 ページ: e115198
  • DOI: 10.1371/journal.pone.0115198
  • 査読あり / オープンアクセス