| 研究概要 |
近年、臨床に導入されたHIVインテグラーゼ（IN）を標的とした薬剤であるラルテグラビル（RAL）は、極めて良好な抗HIV効果を発揮し、他のクラスの抗HIV剤（異なる作用機序を有する）と比較して、人体へ有害な副作用が殆ど認められない。
本研究は、（1）細胞内におけるINの4量体化メカニズムの解析と（2）RALと異なる作用機序であるINの4量体形成を阻害する薬剤の開発、及び（3）INと相互作用する細胞側因子を解析することによって、新規の抗HIV薬としての可能性を追求することを目的としている。
（1）まず、BiFC（bi-molecular fluorescent complementation）-IN assayシステムを構築し、INの多量体化形成に重要なアミノ酸変異体を作成し、それらを共焦点顕微鏡やFACSを用いて比較・検討することによって、細胞内におけるINの多量体化のメカニズム及びそのダイナミクスを明らかにした。
（2）又、すでにINの多量体形成を促進させる薬剤として報告された薬剤（compound 6,7,CX14442）を合成し、前述したBiFC-IN assayシステムを用いてINの多量体形成への影響を評価した。いずれの薬剤も明らかにINの多量体化を促進しており、その定量化されたデータから得られたEC50がMT2細胞およびHIVLAI株を用いたMTTアッセイから得られたEC50とほぼ同等の値うを示しており、多量体化形成の阻害（促進）が抗HIV効果を発揮している事実が示唆された。
（3）INは細胞側因子であるLEDGF/p75、Nup62等と相互作用することが知られており、そのINとの相互作用阻害やそれらのノックダウン細胞におけるHIVの複製は、十分に阻害されることが知られている。我々は、BiFC-IBD (LEDGF/p75) assay やBiFC-Nup62 assay を作成し、実際にINとの相互作用を確認し、それらの蛋白とINの細胞内での局在を明らかにし、ある薬剤がINの局在や蛍光輝度を変化させる（INとLEDGF/p75の相互作用阻害）事実も確認している。
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