| 研究課題/領域番号 |
25670580
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| 研究機関 | 岡山大学 |
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研究代表者 |
藤原 俊義 岡山大学, 医歯(薬)学総合研究科, 教授 (00304303)
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| 研究分担者 |
香川 俊輔 岡山大学, 大学病院, 准教授 (00362971)
白川 靖博 岡山大学, 医歯(薬)学総合研究科, 准教授 (60379774)
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| 研究期間 (年度) |
2013-04-01 – 2015-03-31
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| キーワード | 循環癌細胞 / 上皮間葉転換 / テロメラーゼ / アデノウイルス / TGF-beta / GFP / 遺伝子解析 / PCR |
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| 研究実績の概要 |
癌患者の末梢血中を浮遊している癌細胞（Circulating Tumor Cell：CTC）の検出は、EpCAMやcytokeratinなどの上皮系マーカーを指標とした方法により、その臨床的意義が検討されている。しかし、浸潤・転移などに関わる上皮間葉転換（Epithelial-Mesenchymal Transition：EMT）を生じた癌細胞は理論上検出不能であり、より進化した検出技術の開発が望まれる。本研究では、テロメラーゼ依存性GFP蛍光発現アデノウイルス（TelomeScan）をCTCで選択的に増殖させ、フローサイトメトリーでGFP陽性細胞を捕獲・回収し、既知あるいは未知の遺伝子解析を行う技術を確立することを目的とする。
平成26年度は、健常人の末梢血にEpCAM陰性のPanc-1細胞あるいはTGF-beta処理で人工的にEMTを誘導したA549細胞をspikeしたCTCモデルを用いて遺伝子変異検出を試みた。癌細胞10個ずつを健常者の血液5 mlに混ぜたCTCモデルでTelomeScanを感染、FACS Ariaを用いてGFP陽性かつCD45陰性分画を回収した。DNAを抽出しKRAS、BRAF遺伝子のダイレクトシークエンスを行ったところ、すべての細胞で予想される遺伝子変異を検出できた。また、同様のモデルで、GFP陽性分画（P2分画）およびGFP陽性かつCD45陰性分画（P3分画）を回収した。DNAを抽出しKRAS、BRAF遺伝子のASB-PCRを行ったところ、すべての細胞で予想される遺伝子変異を検出できた。さらに、KRAS, BRAF遺伝子変異を有する大腸癌患者の血液サンプルをASB-PCR法で解析したところ、2例でBRAF変異およびKRAS変異を検出可能で、いずれも遠隔転移を示す病勢を反映した結果と考えられた。
本技術により、病巣にアクセス困難な症例でも末梢血から個別化医療のための遺伝子情報を得ることができ、EMTを生じた癌細胞を解析することで、悪性度や予後をより高精度に予測可能となることが期待される。
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