遺伝子改変眼疾患カニクイザルの作製とその病理学的解析

2013 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 25670742
• 研究機関: 独立行政法人国立病院機構(東京医療センター臨床研究センター)
• 研究代表者: 岩田 岳 独立行政法人国立病院機構(東京医療センター臨床研究センター), 分子細胞生物学研究部, 部長 (90374157)
• 研究分担者: 下澤 律浩 独立行政法人医薬基盤研究所, その他部局等, 研究員 (50300786)
• 研究期間 (年度): 2013-04-01 – 2014-03-31
• キーワード: 霊長類 / ノックアウト / 遺伝子改変 / 疾患モデル動物

研究概要

非ヒト霊長類における眼疾患モデル動物の作成のために、カニクイザル受精卵へのCRISPR/Cas9 システムを用いたゲノム編集技術を検討した。既報に従って、ホルモン剤を雌ザルに投与し、成熟卵子を回収した。また、精子は採取した射出精液を洗浄し、回収した。成熟卵子の細胞質中に精子を直接注入する顕微授精法を実施し、雄雌前核を持つ受精卵を作出した。この前核に目的の眼疾患原因遺伝子を誘導するように構築したCRISPR/Cas9 発現ベクターを注入した。ベクター注入受精卵は１０％FBS 加 CMRL-1066培養液とマウス胎児繊維芽細胞(MEF)の単層上で培養した。通常の顕微授精卵と同様に分裂が生じ、一部は発生を継続し、胚盤胞への発生が確認できた。これはベクターを注入しても受精卵は体外で発生を継続できることを示している。この胚盤胞からES細胞を樹立するために、胚盤胞の内部細胞塊部位摘出し、既報通りMEFの単層上で培養後、小さいながらも内部細胞塊由来と思われる細胞塊を形成した。また、胚移植には、正常な状態を示す初期分割胚を卵管に移植した。現在妊娠の成立を待っているところである。

研究成果

• [雑誌論文] Longitudinal clinical course of three Japanese patients with Leber congenital amaurosis/severe early childhood onset retinal dystrophy with RDH12 mutation. (2014)
  • 著者名/発表者名: Kuniyoshi K, Sakuramoto H, Yoshitake K, Abe K, Ikeo K, Furuno M, Tsunoda K, Kusaka S, Shimomura Y, Iwata T
  • 雑誌名: Documenta Ophthalmologica 巻: 印刷中 ページ: 印刷中
  • 査読あり
• [雑誌論文] Autosomal recessive cone-rod dystrophy associated with compound heterozygous mutations in the EYS gene. (2014)
  • 著者名/発表者名: Katagiri S, Akahori M, Hayashi T, Yoshitake K, Gekka T, Ideo K, Tsuneoka H, Iwata T
  • 雑誌名: Documenta Ophthalmologica 巻: 印刷中 ページ: 印刷中
  • 査読あり
• [雑誌論文] What monitor can replace cathode ray tube for visual stimulation to elicit multifocal electroretinograms? (2014)
  • 著者名/発表者名: Matsumoto CS, Shinoda K, Matsumoto H, Seki K, Nagasaka E, Iwata T, Mizota A
  • 雑誌名: Journal of Vision 巻: 印刷中 ページ: 印刷中
  • 査読あり
• [雑誌論文] Plasma Proteome Analysis On Cynomolgus Monkey (Macaca fascicularis) Pedigrees With Early Onset Drusen Formation. (2014)
  • 著者名/発表者名: Kobayashi H, Okamoto H, Murakami A, Iwata T
  • 雑誌名: Journal of Experimental Animals 巻: 印刷中 ページ: 印刷中
  • 査読あり
• [雑誌論文] Retinal angiomatous proliferation associated with risk alleles of ARMS2/HTRA1 gene polymorphisms in Japanese patients. (2014)
  • 著者名/発表者名: Ohkuma Y, Hayashi T, Sakai T, Watanabe A, Yamada H, Akahori M, Itabashi T, Iwata T, Noda T, Tsuneoka H
  • 雑誌名: Journal of Clinical Ophthalmology 巻: 8 ページ: 143-148
  • 査読あり
• [雑誌論文] Whole-exome sequencing identifies a novel ALMS1 mutation (p.Q2051X) in two Japanese brothers with Alstrom Syndrome. (2013)
  • 著者名/発表者名: Katagiri S, Yoshitake K, Akahori M, Hayashi T, Furuno M, Nishino J, Ikeo K, Tsuneoka H, Iwata T
  • 雑誌名: Molecular Vision 巻: 19 ページ: 2393-2406
  • 査読あり
• [雑誌論文] Two siblings with late-onset cone-rod dystrophy and no visible macular degeneration. (2013)
  • 著者名/発表者名: Sakuramoto H, Kuniyoshi K, Tsunoda K, Akahori M, Iwata T, Shimomura Y
  • 雑誌名: Journal of Clinical Ophthalmology 巻: 7 ページ: 1703-1711
  • 査読あり
• [雑誌論文] [Long-term observation over ten years of four cases of cone dystrophy with supernormal rod electroretinogram]. (2013)
  • 著者名/発表者名: Nakamura N, Tsunoda K, Fujinami K, Shinoda K, Tomita K, Hatase T, Usui T, Akahori M, Iwata T, Miyake Y
  • 雑誌名: Nihon Ganka Gakkai Zasshi 巻: 117 ページ: 629-640
  • 査読あり
• [雑誌論文] Molecular characteristics of four Japanese cases with KCNV2 retinopathy: report of novel disease-causing variants. (2013)
  • 著者名/発表者名: Fujinami K, Tsunoda K, Nakamura N, Kato Y, Noda T, Shinoda K, Tomita K, Hatase T, Usui T, Akahori M, Itabashi T, Iwata T, Ozawa Y, Tsubota K, Miyake Y
  • 雑誌名: Molecular Vision 巻: 19 ページ: 1580-1590
  • 査読あり
• [雑誌論文] Enhanced optineurin E50K-TBK1 interaction evokes protein insolubility and initiates familial primary open-angle glaucoma. (2013)
  • 著者名/発表者名: Minegishi Y, Iejima D, Kobayashi H, Chi Z-L, Kawase K, Yamamoto T, Seki T, Yuasa S, Fukuda K, Iwata T
  • 雑誌名: Human Molecular Genetics 巻: 22 ページ: 3559-3567
  • 査読あり
• [雑誌論文] 日米の眼研究の架け橋 Jin H. Kinoshita先生を偲んで （編集：堀田喜裕） (2013)
  • 著者名/発表者名: 岩田岳 （編集：堀田喜裕）
  • 雑誌名: あたらしい眼科 巻: 30 ページ: 1417-1418
  • 査読あり
• [図書] RETINA Medicine (2014)
  • 著者名/発表者名: 赤堀正和、岩田岳
  • 総ページ数: 5
  • 出版者: 先端医学社
• [図書] Animal Models for Eye Diseases, Handbook of Laboratory Animal Science III (2014)
  • 著者名/発表者名: Iwata T, (Editor: Hau J and Schapiro SJ)
  • 総ページ数: 23
  • 出版者: CRC Press