• 研究課題をさがす
  • 研究者をさがす
  • KAKENの使い方
  1. 課題ページに戻る

2014 年度 実績報告書

FFPE組織とがん細胞株を利用したがん幹細胞とその微小環境のプロテオミクス解析

研究課題

研究課題/領域番号 25710013
研究機関静岡県立静岡がんセンター(研究所)

研究代表者

畠山 慶一  静岡県立静岡がんセンター(研究所), その他部局等, その他 (20564157)

研究期間 (年度) 2013-04-01 – 2016-03-31
キーワードプロテオミクス
研究実績の概要

本研究では、固形がんにおける予後予測診断システムの構築を最終目的とした、がん幹細胞様細胞とその微小環境のプロテオミクス解析を行う。はじめに、ホルマリン固定されたがん細胞株を用いて、タンパク質抽出法及びLC-MS解析の最適化を行う。その後、患者由来の大腸がんFFPE組織切片を用いてプロテオミクス解析を行う。がん幹細胞及びその周辺組織で発現変動が確認されたタンパク質を候補分子とする。次に、がん細胞株を用いて候補分子群の機能解析を行う。その後、単一細胞解析によって候補分子群によって分化/脱分化を引き起こす細胞集団の分離を試みる。最後に、がん幹細胞の分布とその周辺組織で高発現しているタンパク質または遺伝子群の分布パターンから予後不良または良好となるパターン抽出を試みる。
昨年度、タンパク質抽出方法の検討を行ったところ、大腸がん患者のFFPE組織を用いたプロテオミクス解析には、少なくとも3 x 3 mm2 (約20,000細胞)必要であることが示唆された。そのため、がん幹細胞をこのオーダーで回収するのは、困難であると考えられた。そのため、FFPE組織切片から直接の候補分子の同定ではなく、細胞株からの同定を試みることとした。また、全体の遺伝子発現を確認するために、大腸腫瘍組織からのマイクロアレイ解析も同時に行うこととした。特に、分泌タンパク質に注目して遺伝子発現解析を実施した。また、公共データベースの情報も利用した解析も行った。

現在までの達成度 (区分)
現在までの達成度 (区分)

4: 遅れている

理由

本申請は、プロテオミクス解析を利用して、がん幹細胞様細胞とその微小環境との関わりを明らかにし、その結果を元に固形がんにおける予後予測診断システムの構築を最終目的としている。本研究は、
1. サンプルの前処理、2.解析手法の確立、3. 解析で得た候補分子の機能解析、4. がん幹細胞の単一細胞解析、5.微小環境のパターン解析、6. 新規予後診断システムの構築からなる。
昨年度、1及び2の達成度が不十分だったことと、今年度購入予定だったC1システムの納入が、大幅に遅れたことにより、研究遂行が十分とはいえなかった。そのため本研究は「遅れている(Delayed)」と考えられる。

今後の研究の推進方策

現段階において、研究は遅れている。遅れている要因の1つは、機器納入の遅れである。その点を考慮し、申請した研究計画できる限り従い、研究を推進していく。
平成27年度は、昨年度十分に達成できなかった、がん幹細胞の単一細胞解析を行っていく。当施設内で次世代シーケンサの使用も可能になったため、計画書には書かれていないが、遺伝子の機能解析等で利用できると判断した場合は、利用していく。

次年度使用額が生じた理由

昨年度のC1システムの納入が遅れたため、その分実験が進まなかった。
その進まなかった分の実験を次年度に繰り越す。

次年度使用額の使用計画

昨年度に、する予定だった実験器具の購入。主に、C1システムの消耗品を購入することとする。

  • 研究成果

    (4件)

すべて 2015 2014

すべて 雑誌論文 (1件) (うち査読あり 1件、 謝辞記載あり 1件) 学会発表 (3件)

  • [雑誌論文] A novel splice variant of XIAP-associated factor 1 (XAF1) is expressed in peripheral blood containing gastric cancer-derived circulating tumor cells2015

    • 著者名/発表者名
      Keiichi Hatakeyama, Yushi Yamakawa, Yorikane Fukuda, Keiichi Ohshima, Kanako Wakabayashi-Nakao, Naoki Sakura, Yutaka Tanizawa, Yusuke Kinugasa, Ken Yamaguchi, Masanori Terashima and Tohru Mochizuki
    • 雑誌名

      Gastric Cancer

      巻: 18 ページ: 751-761

    • DOI

      10.1007/s10120-014-0426-3

    • 査読あり / 謝辞記載あり
  • [学会発表] Prognostic significance of survivin expression in patients with gastric cancer2014

    • 著者名/発表者名
      M.Terashima, K. Hatakeyama, Y. Yamakawa, Y. Miki, R. Makuuchi, S. Honda, T. Tatsubayashi, M. Tokunaga, Y. Tanizawa, E. Bando, T. Kawamura, K. Oshima, T. Mochizuki
    • 学会等名
      European Society for Medical Oncology
    • 発表場所
      Madrid, Spain
    • 年月日
      2014-09-26 – 2014-09-30
  • [学会発表] Novel splice variant of XIAP-associated factor 1 (XAF1) is expressed in peripheral blood of patient with gastric cancer2014

    • 著者名/発表者名
      Keiichi Hatakeyama, Yushi Yamakawa, Keiichi Ohshima, Kanako Nakao, Yutaka Tanizawa, Yusuke Kinugasa, Ken Yamaguchi, Masanori Terashima, Tohru Mochizuki
    • 学会等名
      第73回日本癌学会学術総会
    • 発表場所
      神奈川県, 横浜市
    • 年月日
      2014-09-25 – 2014-09-27
  • [学会発表] Survivin expression in peripheral blood is a significant prognostic marker in patients with gastric cancer2014

    • 著者名/発表者名
      M.Terashima, K. Hatakeyama, Y. Yamakawa, N. Sugisawa, Y. Miki, R. Makuuchi, H. Goto, M. Tokunaga, Y. Tanizawa, E. Bando, T. Kawamura, K. Oshima, T. Mochizuki
    • 学会等名
      American Society of Clinical Oncology
    • 発表場所
      Chicago, IL, USA
    • 年月日
      2014-05-30 – 2014-06-03

URL: 

公開日: 2016-06-01  

サービス概要 検索マニュアル よくある質問 お知らせ 利用規程 科研費による研究の帰属

Powered by NII kakenhi