研究課題
本研究では、固形がんにおける予後予測診断システムの構築を最終目的とした、がん幹細胞様細胞とその微小環境のプロテオミクス解析を行う。はじめに、ホルマリン固定されたがん細胞株を用いて、タンパク質抽出法及びLC-MS解析の最適化を行う。その後、患者由来の大腸がんFFPE組織切片を用いてプロテオミクス解析を行う。がん幹細胞及びその周辺組織で発現変動が確認されたタンパク質を候補分子とする。次に、がん細胞株を用いて候補分子群の機能解析を行う。その後、単一細胞解析によって候補分子群によって分化/脱分化を引き起こす細胞集団の分離を試みる。最後に、がん幹細胞の分布とその周辺組織で高発現しているタンパク質または遺伝子群の分布パターンから予後不良または良好となるパターン抽出を試みる。初年度に、タンパク質抽出方法の検討を行ったところ、大腸がん患者のFFPE組織を用いたプロテオミクス解析には、少なくとも3 x 3 mm2 (約20,000細胞)必要であることが示唆された。そのため、がん幹細胞をこのオーダーで回収するのは、困難であると考えられた。このような経緯から昨年度は、FFPE組織切片から直接の候補分子の同定ではなく、細胞株からの同定を試みることとした。そこから、同一と考えられていた細胞集団においてタンパク質のプロファイリングが異なることを見いだした。また、単一細胞の遺伝子発現解析から、それら細胞集団の中でも個々の細胞の遺伝子発現が大きく異なることが観察された。しかしながら、目的の遺伝子発現が高い細胞だけが本当に、その目的のタンパク質を多く分泌しているのかまでは、確認することができなかった。この結果を踏まえて、新たな測定方法を提案し、基板研究(C)に採択された。これを弾みに、研究としての新たな展開を目指す。
27年度が最終年度であるため、記入しない。
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Gastric Cancer
巻: 18 ページ: 751-761
10.1007/s10120-014-0426-3
