| 研究課題/領域番号 |
25711014
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| 研究機関 | 京都大学 |
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研究代表者 |
中川 俊徳 京都大学, 再生医科学研究所, 研究員 (50456894)
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| 研究期間 (年度) |
2013-04-01 – 2017-03-31
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| キーワード | 幹細胞 / 精巣 / 精子 |
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| 研究実績の概要 |
精子幹細胞には、実際に正常な状態で幹細胞として振る舞う分画(ASC)と、通常ならば分化するが傷害を受けた時に幹細胞能を発揮する分画(PSC)が存在する。ASCからPSCは生み出されることから、精子幹細胞には階層性が存在することが示されている。本研究は、精子幹細胞の階層性を制御する分子機構を明らかにすることを目的とした。
1)精子幹細胞の亜集団の分取する実験系と候補遺伝子の探索
これまでの研究で、精子幹細胞を高度に濃縮する方法を作成し、それを用いて精子幹細胞に特異的に発現する遺伝子の候補を、トランスクリプトーム解析を行い、明らかにした。この候補遺伝子のFloxマウスを作成するために、相同組み換え法を用いたBAC改変技術を導入し、コンストラクションを行った。作成したコンストラクトを用いてFloxアリルを持つES細胞を作成した。このES細胞を用いてFloxマウスを作成した。Floxアリルが、次の世代に受け渡されることを確認した。現在、Creリコンビナーゼを発現するトランスジェニックマウスと掛け合わせ、生殖細胞での機能を検討中である。
2)精子幹細胞の培養系を用いた、候補遺伝子の機能解析
候補遺伝子の機能を検討するために、培養精子幹細胞に候補遺伝子を強制発現した。その結果、生殖細胞の分化に必須な遺伝子の発現が抑制されることを見出した。一方、siRNAを用いて候補遺伝子の機能抑制を試みたが、十分に遺伝子の発現を抑制できなかった。今後候補遺伝子を条件的に欠損できる培養精子幹細胞株を作成し、検討する。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
精子幹細胞の階層性を制御する遺伝子の候補を同定し、そのFloxマウスを作成できたため。
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| 今後の研究の推進方策 |
精子幹細胞の階層性を制御する遺伝子の候補を同定し、そのFloxマウスを作成できた。本年度は生殖細胞に特異的にCreリコンビナーゼを発現するトランスジェニックマウスと掛け合わせ、候補遺伝子の機能を検討する。
生体内での解析に加え、培養精子幹細胞を用いて候補遺伝子の機能を解析する。そのために新たな実験系を導入する。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
H26年から引き続き行う、培養マウス精子幹細胞を使用した実験の試薬を購入するため。新しい試薬が最適であるので、使用直前に購入したいため。
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| 次年度使用額の使用計画 |
培養精子幹細胞の遺伝子発現に影響を与える物質を購入する。
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