| 研究課題/領域番号 |
25713046
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| 研究機関 | 京都大学 |
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研究代表者 |
木村 寛之 京都薬科大学, 薬学部, 准教授 (50437240)
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| 研究期間 (年度) |
2013-04-01 – 2017-03-31
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| キーワード | 原発性アルドステロン症 / アルドステロン産生腺腫 / PET/SPECT用イメージングプローブ / CYP11B2選択的 |
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| 研究実績の概要 |
本研究の目的は、アルドステロン産生腺腫が引き起こす原発性アルドステロン症（PA）の発症に関わる分子機構を標的として、医薬品化学および薬物動態学的な観点から分子設計を行い、副腎でのPA責任病変を高感度で検出・評価しうるPET/SPECT用分子イメージングプローブの開発を行うことにある。ステロイド生合成系において、アルドステロン合成酵素（CPY11B2）はアルドステロン合成のみに関与する酵素である一方、ステロイド11β‐水酸化酵素（CPY11B1）は、アルドステロン及びコルチゾールの両方の合成に関与する。従って、アルドステロンの過剰分泌をコルチゾールの過剰分泌と区別して検出することには、CPY11B2に対する選択性が高いことが好ましい。
PET/SPECT用イメージングプローブとしては、これまでの研究成果を基に構造活性相関研究を行い、CYP11B2への選択性（（Selectivity Factor (S.F.) = IC50CYP11B1 / IC50CYP11B2）を向上させた誘導体（SF=223, IC50B2=0.63 nM）の開発に成功している。プローブの開発は計画通りに進んでいたが、in vitroの評価系を見直したところ組織切片を用いたCPY11B1、CPY11B2の免疫染色法を再構築する必要性が生じた。これまで、免疫染色に関しては上手く行えていなかったが、最近市販された抗体を用いることでこの問題を解決出来ることが分かった。また、市販のヒト患者組織切片を用いて免疫染色を行ったところ、切片間でのバラつきが大きく開発したプローブを用いたオートラジオグラフィ―との乖離も見受けられた。今後は、病理診断が付いている患者組織切片が新たに入手可能となったため、そちらのサンプルを用いて評価を進める。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
in vitroの評価系を見直したところ、組織切片を用いたCPY11B1、CPY11B2の免疫染色法を再構築する必要性が生じた。これまで、免疫染色に関しては上手く行えていなかったので、その条件検討などに想定外の時間を費やしてしまった。しかし、最近市販された抗体を用いることでこの問題を解決出来ることが分かった。in vitroの評価系の構築が遅れたため、化合物のスクリーニングが完全に終わっておらず、全ての化合物の評価までは至っていない。また、モデル動物の作製が難航しており、モデル動物を用いた体内分布実験、PET/SPECTの撮像実験までは至っていない。現在は、患者組織切片を用い、開発したプローブのオートラジオグラフィ―で特異性の評価を行っている。
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| 今後の研究の推進方策 |
１年間研究期間を延長し、以下の課題に取り組む。①患者組織切片を用いて、開発したプローブの特異性の証明を行う。具体的には、ヒト副腎腺腫切片を用いて、CYP11B2免疫染色と開発したプローブのオートラジオグラフィーを行った後、CYP11B2の発現部位とプローブの集積部位の一致を評価する。②モデル動物の作製として、ラット低ナトリウム負荷モデルを検討する。もしくは、CPY11B1、CPY11B2を発現させたV79細胞をそれぞれ保有しているので、この細胞を移植したモデルマウスの構築を行う。移植した組織中でのCPY11B1、CPY11B2の発現量は、ウェスタンブロットかPCRで行う予定である。もしモデル動物の作製が困難な場合は、正常なマウス、ラットを用いた体内分布実験を行い、副腎への集積性を評価する。前述の課題がクリアーされれば、合成済みの化合物の評価を実施し、プローブの最適化を行う。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
in vitroの評価系を見直したところ、組織切片を用いたCPY11B1、CPY11B2の免疫染色法を再構築する必要性が生じた。これまで、免疫染色に関しては上手く行えていなかったので、その条件検討などに想定外の時間を費やしてしまい研究に遅れが生じた。しかし、最近市販された抗体を用いることでこの問題を解決出来ることが分かった。in vitroの評価系の構築が遅れたため、化合物のスクリーニングが完全に終わっておらず、全ての化合物の評価までは至っていない。また、モデル動物の作製が難航しており、モデル動物を用いた体内分布実験、PET/SPECTの撮像実験までは至っていない。これらの課題をクリアーし、化合物の最適化を行うために１年間の研究期間の延長を行った。
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| 次年度使用額の使用計画 |
消耗品費として、プローブ合成用の試薬や器具、RI、動物、抗体、細胞や培養関係の消耗品などに使う予定である。旅費として、研究成果を学会で発表するための予算を計上している。また、その他の予算として、論文の英文校正費、雑誌への掲載料などを計上している。
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