p53脱ユビキチン化酵素USP7の新規制御機構の解明

2014 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 25830078
• 研究機関: 名古屋大学
• 研究代表者: 加藤 琢哉 名古屋大学, 医学(系)研究科(研究院), 特任助教 (00551970)
• 研究期間 (年度): 2013-04-01 – 2015-03-31
• キーワード: USP7 / RFP

研究実績の概要

前年度に引き続き、RFPとUSP7の相互作用領域についてUSP7の欠失変異体を作製し、免疫沈降法を用いて検討した。その結果、USP7のHUBLドメインの1,2を含む約200アミノ酸の領域がこの相互作用に重要であることが判明した。今後さらに相互作用領域の絞り込みが必要と考えられる。
前年度の結果からRFPがp53のSUMO化を触媒するE3 ligaseであることが分かってきた。そこで、RFPがp53のどのアミノ酸残基に対してSUMOを付加するのか、p53の点突然変異体を作製して検討した。その結果、既にSUMO化サイトとして報告のあるK386をアルギニンに置換した変異体においてRFP依存的なp53のSUMO化の減弱が認められた。このことから、RFPはp53の386番目のリジン残基をSUMO化しているものと考えられた。
がん細胞においてRFPおよびUSP7によるp53の制御がどのような意義を有するのか、がん細胞のUV耐性に着目して検討した。p53野生型およびp53欠失型の大腸がん細胞株HCT116 （WTおよびp53-/-）において、siRNAによりRFPもしくはUSP7をノックダウンし、UV照射後にアポトーシス細胞の計測を行った。その結果、p53 WTの細胞ではRFPないしUSP7のノックダウンによってがん細胞のUVに対する抵抗性の低下が認められた一方、p53 -/-の細胞ではそれらの遺伝子発現の低下はがん細胞のUV抵抗性に影響を与えないことが分かった。この結果は、RFPとUSP7がp53の機能制御を介してがん細胞のストレス抵抗性に影響を与えていることを示している。

研究成果

• [雑誌論文] Akt-girdin signaling in cancer-associated fibroblasts contributes to tumor progression. (2015)
  • 著者名/発表者名: Yamamura Y, Asai N, Enomoto A, Kato T, Mii S, Kondo Y, Ushida K, Niimi K, Tsunoda N, Nagino M, Ichihara S, Furukawa K, Maeda K, Murohara T, Takahashi M.
  • 雑誌名: Cancer Research 巻: 75 ページ: 813-823
  • DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-14-1317.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Identification of the novel autoantigen candidate Rab GDP dissociation inhibitor alpha in isolated adrenocorticotropin deficiency. (2015)
  • 著者名/発表者名: Kiyota A, Iwama S, Sugimura Y, Takeuchi S, Takagi H, Iwata N, Nakashima K, Suzuki H, Nishioka T, Kato T, Enomoto A, Arima H, Kaibuchi K, Oiso Y.
  • 雑誌名: Endocrine Journal 巻: 62 ページ: 153-160
  • DOI: 10.1507/endocrj.EJ14-0369.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Regulation of cargo-selective endocytosis by dynamin 2 GTPase-activating protein girdin. (2014)
  • 著者名/発表者名: Weng L, Enomoto A, Miyoshi H, Takahashi K, Asai N, Morone N, Jiang P, An J, Kato T, Kuroda K, Watanabe T, Asai M, Ishida-Takagishi M, Murakumo Y, Nakashima H, Kaibuchi K, Takahashi M.
  • 雑誌名: EMBO Journal 巻: 33 ページ: 2098-2112
  • DOI: 10.15252/embj.201488289.
  • 査読あり
• [雑誌論文] TRIM27/MRTF-B-dependent integrin β1 expression defines leading cells in cancer cell collectives. (2014)
  • 著者名/発表者名: Kato T, Enomoto A, Watanabe T, Haga H, Ishida S, Kondo Y, Furukawa K, Urano T, Mii S, Weng L, Ishida-Takagishi M, Asai M, Asai N, Kaibuchi K, Murakumo Y, Takahashi M.
  • 雑誌名: Cell Reports 巻: 7 ページ: 1156-1167
  • DOI: 10.1016/j.celrep.2014.03.068.
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [学会発表] TRIM27 - USP7 による p53 制御機構の解明 (2014)
  • 著者名/発表者名: 加藤 琢哉、榎本 篤、浅井 真人、浅井 直也、高橋 雅英
  • 学会等名: 第103回日本病理学会総会
  • 発表場所: 広島国際会議場（広島県広島市）
  • 年月日: 2014-04-24