| 研究課題/領域番号 |
25840043
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| 研究種目 |
若手研究(B)
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| 研究機関 | 独立行政法人理化学研究所 |
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研究代表者 |
立田 由里子 独立行政法人理化学研究所, 疾患糖鎖研究チーム, 技師 (70392024)
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| 研究期間 (年度) |
2013-04-01 – 2016-03-31
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| キーワード | O結合型糖鎖 / アルツハイマー病 / APP / Aβ / Clickケミストリー |
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| 研究概要 |
アルツハイマー病はアミロイドβ前駆体タンパク質(APP)がβ部位およびγ部位で切断されることによって生じるアミロイドβペプチド(Aβ)が脳実質に過剰に蓄積することが発症の引き金となっている。前年度までの研究結果から、APPのO―結合型糖鎖付加がアルツハイマー病発症原因の一つであるAβ産生を左右していることがわかってきた。そこで、今年度はAPPのO―結合型糖鎖付加が細胞内において、いつ・どこで起きているのか、さらに糖鎖修飾の有無とAβ産生経路がどのような関係を持つのかを明らかにするため、可視化イメージング観察を目的とした、細胞染色ツールの作製と条件検討を行っている。
以下に２５年度の新たな知見について報告する。
１、これまで一般的にはタンパク質は細胞膜へ移行する前の細胞内で糖鎖修飾を受けていると考えられており、細胞膜移行後に糖鎖修飾を受けているとは考えられていなかった。しかし、２５年度私はAPPが細胞膜表面に移行後、O―結合型糖鎖修飾を受けていることをClickケミストリーの手法を用い生化学的に証明した。
２、APPの代謝とO-結合型糖鎖付加に深い関わりがあることがわかってきたので、２５年度はAPPにO―結合型糖鎖を付加する糖転移酵素の探索を行い絞り込んだ。
３、様々な細胞内コンパートメントマーカーとの共染色を行うことにより、APPの細胞内局在を示すことができた。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
1: 当初の計画以上に進展している
理由
細胞染色などの実験は計画通り進んでおり、それに加え当初の計画にはなかった、APPが細胞膜移行後にもO-結合型糖鎖の付加がおこっていることを、Clickケミストリーの手法を用いて生化学的に証明することができたため。
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| 今後の研究の推進方策 |
APPの細胞内動態のイメージング解析は２５年度でほぼ結果を得られているので、２６年度はAPPの細胞内動態とO-結合型糖鎖付加の関係を明らかにするためのイメージング解析をClickケミストリーの手法を用いて進める。また、APPのO-結合型糖鎖付加をコントロールすることによってアルツハイマー病発症原因と言われているAβの産生がどのように変化するかを追跡する。
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| 次年度の研究費の使用計画 |
２５年度は様々な系の予備実験を中心としたため、試薬などの購入を少量で済ませることにより予算を抑えるようにしたため。
２６年度は２５年度の予備実験の結果を元に、本格的な実験に移るため大量の試薬購入が必要となってくる。また、使用している細胞も特殊な細胞であるため高額であり、２６年度の実験計画を遂行する為には数回の購入が必要になってくる。これらの購入のための予算として２５年度の残額を２６年度に当てる。
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