精子形成細胞の分化研究を明らかにする免疫電顕クロマトイドミクス解析

2014 年度 実施状況報告書

• 研究課題/領域番号: 25840119
• 研究機関: 長崎国際大学
• 研究代表者: 藤井 佑樹 長崎国際大学, 薬学部, 助教 (80610063)
• 研究期間 (年度): 2013-04-01 – 2016-03-31
• キーワード: Argonaute-2 / 精子形成 / RNA誘導型サイレンシング複合体 / ヌアージュ

研究実績の概要

正常な遺伝子を保護し異常なmRNAを切断する、RNA型サイレンシング複合体の主要成分、Argonaute-2（Ago2）タンパク質の精子細胞分化過程での発現を観察した。抗ラットAgo2ポリクローナル抗体を用いて精巣の超微形態観察を行うと、Ago2は精母細胞のステージVIIIでヌアージュ構造であるLoose aggregate Structure に発現を認めた。分化が進行したステージXでは、Intermitochondrial cementにAgo2の発現が移行することが判明した。精子細胞に分化後は、Ago2はステップ1から6でクロマトイドボディーに局在し、それ以上の分化段階で、Ago2が消失していくことを明らかにできた。

現在までの達成度 (区分)

2: おおむね順調に進展している

理由

抗Ago2抗血清の作製に成功し、ラット精巣内の精母細胞・精子細胞でのAgo2の発現時期を見出すことが出来た。

今後の研究の推進方策

配偶子細胞で健常なmRNAを維持するしくみを明らかにするため、Ago2に加えて、他のRNA型サイレンシング複合体の成分解明に取り組む。抗Ago2抗体を利用し、RNA型サイレンシング複合体分子を共精製する条件の検討を行う。複合体を構成する分子が精製できたら、その分子の同定を行い、抗体を作製し、電顕による発現の観察に役立てる。

次年度使用額が生じた理由

電顕用の包埋試薬の輸入による入荷の遅れから、前年度内に購入することが困難であったため。

次年度使用額の使用計画

電顕用の包埋樹脂の条件検討を行いながら、ラット精巣内のAgo2とその関連分子の発現を観察する。

研究成果

• [雑誌論文] Expression of various types of glycans in the lugworm (Perinereis nuntia var. vallata) (2015)
  • 著者名/発表者名: Koide Y, Hasan I, Asanuma A, Fujii Y, Ogawa Y, Kobayashi H, Rajia S, Kawsar SMA, Kanaly RA, Ozeki Y.
  • 雑誌名: Annals of Marine Biology and Research 巻: ２ ページ: 1005
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] A Galactose-Binding Lectin Isolated from Aplysia kurodai (Sea Hare) Eggs Inhibits Streptolysin-Induced Hemolysis. (2014)
  • 著者名/発表者名: Hasan I., Watanabe M, Ishizaki N., Sugita-Konishi Y., Kawakami Y, Suzuki J., Dogasaki C., Rajia S., Kawsar S.M.A., Koide Y., Kanaly R.A., Sugawara S., Hosono M., Ogawa Y., Fujii Y., Iriko H., Hamako J., Matsui T., Ozeki Y
  • 雑誌名: Molecules 巻: 19 ページ: 13990-14003
  • DOI: 10.3390/molecules190913990
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Inulavosin and its benzo-derivatives, melanogenesis inhibitors, target the copper loading mechanism to the active site of tyrosinase. (2014)
  • 著者名/発表者名: Fujita H., Menezes J.C., Santos S.M., Yokota S., Kamat S.P., Cavaleiro J.A., Motokawa T., Kato T., Mochizuki M., Fujiwara T., Fujii Y., Tanaka Y.
  • 雑誌名: Pigment Cell Melanoma Res. 巻: 27 ページ: 376-386
  • DOI: 10.1111/pcmr.12225.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Sialyl-glycoconjugates in cholesterol-rich microdomains of P388 cells are the triggers for apoptosis induced by Rana catesbeiana oocyte ribonuclease. (2014)
  • 著者名/発表者名: Ogawa Y., Sugawara S., Tatsuta T., Hosono M., Nitta K., Fujii Y., Kobayashi H., Fujimura T., Taka H., Koide Y., Hasan I., Matsumoto R., Yasumitsu H., Kanaly R.A., Kawsar S.M.A., Ozeki Y.
  • 雑誌名: Glycoconj J 巻: 31 ページ: 171-184
  • DOI: 10.1007/s10719-013-9513-7
  • 査読あり
• [学会発表] The molecular morphology of the cytotoxic retrotranslocation by an N-acetylhexosamine-binding lectin isolated from slipper lobster in breast and ovarian cancer cells. (2014)
  • 著者名/発表者名: Fujii Y., Fujiwara T., Ogawa Y., Sugawara S., Hosono M., Hasan I., Koide Y., Kawsar S.M.A., Ozeki Y., Fujita H.
  • 学会等名: Joint Meeting of the Society for Glycobiology (SFG) and the Japanese Society of Carbohydrate Research (JSCR), 米国糖鎖生物学会、日本糖質学会合同会議
  • 発表場所: 米国、ハワイ州、ホノルル市
  • 年月日: 2014-11-16 – 2014-11-19
• [学会発表] A sialic acid-binding lectin (SBL)-dependent apoptosis is triggered by sialylated-glycoconjugates in GEM of P388 cells (2014)
  • 著者名/発表者名: Ogawa Y., Fujii Y., Sugawara S.,Hosono M., Takeo T., Nitta K., Koide Y., Hasan I., Kawsar S.M.A., Kobayashi H., Ozeki Y.
  • 学会等名: Joint Meeting of the Society for Glycobiology (SFG) and the Japanese Society of Carbohydrate Research (JSCR), 米国糖鎖生物学会、日本糖質学会合同会議
  • 発表場所: 米国、ハワイ州、ホノルル市
  • 年月日: 2014-11-16 – 2014-11-19
• [学会発表] Intracellular trafficking of Mytilec, a Gb3-specific R-type mussel lectin with cytotoxic activity (2014)
  • 著者名/発表者名: Hasan I., Fujii Y., Ogawa Y., Sugawara S., Hosono M., Koide Y., Rajia S., Kawsar S.M.A., Kanaly R.A., Fujiwara T., Fujita H., Ozeki Y.
  • 学会等名: Joint Meeting of the Society for Glycobiology (SFG) and the Japanese Society of Carbohydrate Research (JSCR), 米国糖鎖生物学会、日本糖質学会合同会議
  • 発表場所: 米国、ハワイ州、ホノルル市
  • 年月日: 2014-11-16 – 2014-11-19
• [学会発表] Inulavosin and its benzo-derivatives affect on copper-loading mechanism to tyrosinase, a key enzyme of melanin synthesis in melanocytes. (2014)
  • 著者名/発表者名: Fujita H., Menezes J, Santos S.M., Yokota S, Kamat S.P., Cavaleiro J.A.S, Motokawa T., Kato Tomomi, Mochizuki M., Fujii Y., Fujiwara T.
  • 学会等名: XXII International Pigment Cell Conference (IPCC2014)
  • 発表場所: シンガポール
  • 年月日: 2014-09-04 – 2014-09-07