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2014 年度 実績報告書

全DNA損傷体定量分析のための超高感度分析プラットフォーム構築

研究課題

研究課題/領域番号 25860024
研究機関愛知工業大学

研究代表者

村上 博哉  愛知工業大学, 工学部, 講師 (40515128)

研究期間 (年度) 2013-04-01 – 2015-03-31
キーワードDNA付加体 / LC-MS / CE-MS / ガン / 網羅的
研究実績の概要

平成26年度における研究成果としては,まずDNA付加体の2’-deoxynucleotide体の選択的捕捉法の確立を行った.この手法には,前年度にDNA付加体の2’-deoxynucleoside体を選択的に捕捉可能な前処理デバイスの固定相担体を変更し,2’-deoxynucleotideの選択的捕捉が可能なチップ型固定相の作製および条件の最適化を行った.その結果,固定相担体および抽出溶媒,および抽出方法を最適化することで,高回収率にて2’-deoxynucleotide体を回収可能であるその一方で,2’-deoxynucleosideを除去することが可能なシステムの構築に成功した.
これらの前処理手法と並行して,平成25年度より継続し,ESIのイオン化効率改善を目的とした溶離液の最適化をさらに進めた.分離系にhydrophilic interaction chromatography(HILIC)を採用し,高有機溶媒組成条件下における分離と溶離液に加える添加剤の最適化を行った.モデル化合物として用いたacetaldehyde由来のDNA付加体に関して条件の最適化を行った結果,イオン化効率を約1桁上昇させることに成功した.この確立したシステムを用いることで,臓器中のDNA付加体の定量分析が可能であることが明らかとなった.
また2’-deoxynucleotideを対象とする分析では,CE-MSを用いた分析が非常に有効であるが,2’-deoxynucleotideは,陰イオン性物質であることからESI-MSのイオン化効率の低さが問題点であった.これを改善するために,錯体化などを駆使することによって,2’-deoxynucleotideを陽イオン化することに成功し,通常のnegative modeでの測定と比較して,1桁以上の感度上昇を達成した.

  • 研究成果

    (9件)

すべて 2015 2014

すべて 雑誌論文 (3件) (うち査読あり 3件、 謝辞記載あり 1件) 学会発表 (6件) (うち招待講演 1件)

  • [雑誌論文] Automatic On-Line Solid Phase Extraction-Electrothermal Atomic Absorption Spectrometry Exploiting Sequential Injection Analysis for Trace Vanadium, Cadmium and Lead Determination in Human Urine Samples2015

    • 著者名/発表者名
      G. Giakisikli, A. A. Quezada, J. Tanaka, A. N. Anthemidis, H. Murakami, N. Teshima, T. Sakai
    • 雑誌名

      Anal. Sci

      巻: 印刷中 ページ: 印刷中

    • DOI

      in press

    • 査読あり / 謝辞記載あり
  • [雑誌論文] Simultaneous Analysis of Polymethoxyflavones and Flavanone glycosides in Citrus Fruits by Micellar Electrokinetic Chromatography Using Sodium Deoxycholate2014

    • 著者名/発表者名
      Y. Esaka, N. Kato, H. Murakami, B. Uno, H. Murata, M. Inuma, T. Tanaka
    • 雑誌名

      Chromatography

      巻: 35 ページ: 155-162

    • DOI

      10.15583/jpchrom.2014.025

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Stepwise Elusion Method in Micellar Electrokinetic Chromatography via Sequential Use of Lithium Perfluorooctadecyl Sulfonate and Lithium Dodecyl Sulfate2014

    • 著者名/発表者名
      Y. Esaka, F. Rin, M. Kobayashi, R. Osako, H. Murakami, B. Uno
    • 雑誌名

      J. Chromatogr. A

      巻: 1358 ページ: 261-268

    • DOI

      10.1016/j.chroma.2014.06.073

    • 査読あり
  • [学会発表] 動電過給導入―シースレスESI-MSによるヌクレオチド検出法の開発2015

    • 著者名/発表者名
      江坂幸宏,岡本哲郎,宇野文二,村上博哉,鳥村政基,廣川健,石濱泰
    • 学会等名
      日本薬学回第135年会
    • 発表場所
      神戸学院大学(兵庫県神戸市)
    • 年月日
      2015-03-26 – 2015-03-28
  • [学会発表] LC-MSを用いたacetaldehyde由来DNA損傷体の高感度定量分析法の開発2014

    • 著者名/発表者名
      村上博哉,岩田朋子,堀場瑠莉,川島静香,金子和弘,宇野文二,鳥村政基,手嶋紀雄,石濱泰,江坂幸宏
    • 学会等名
      第25回クロマトグラフィー科学会議
    • 発表場所
      京都大学(京都府京都市)
    • 年月日
      2014-12-10 – 2014-12-12
  • [学会発表] Development of CE Focusing-ESI-MS Methods for Highly Sensitive Detection of Damaged Nucleotides2014

    • 著者名/発表者名
      Yukihiro Esaka, Hiroya Murakami, Ryohei Osako, Mika Urushibara, Bunji Uno, Masaki Torimura, Yasushi Ishihama, Takeshi Hirokawa
    • 学会等名
      14th Asia-Pacific International Symposium on Microscale Separations and Analysis
    • 発表場所
      京都大学(京都府京都市)
    • 年月日
      2014-12-07 – 2014-12-10
  • [学会発表] 質量分析法を基盤技術とするDNA損傷体定量のための分析プラットフォームの構築2014

    • 著者名/発表者名
      村上博哉
    • 学会等名
      低侵襲な化学診断法のための呼気・尿バイオマーカー分析法に関する研究会
    • 発表場所
      ウィンクあいち(愛知県名古屋市)
    • 年月日
      2014-10-10 – 2014-10-10
    • 招待講演
  • [学会発表] Acetaldehyde由来DNA損傷体定量のための高感度HILIC-ESI-MS分析系の開発2014

    • 著者名/発表者名
      岩田朋子,村上博哉,堀場瑠莉,川島静香,金子和弘,石濱泰,手嶋紀雄,江坂幸宏,宇野文二
    • 学会等名
      第27回バイオメディカル分析科学シンポジウム
    • 発表場所
      帝京大学(東京都板橋区)
    • 年月日
      2014-08-20 – 2014-08-21
  • [学会発表] CE高集束―オンライン錯体化ESI-MS法による損傷ヌクレオチド検出法の開発2014

    • 著者名/発表者名
      江坂幸宏,大迫亮平,村上博哉,榊原崇芳,堀場瑠莉,岡本哲郎,宇野文二,鳥村政基,廣川健,石濱泰
    • 学会等名
      第27回バイオメディカル分析科学シンポジウム
    • 発表場所
      帝京大学(東京都板橋区)
    • 年月日
      2014-08-20 – 2014-08-20

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公開日: 2016-06-01  

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