3次元培養を用いた下垂体前葉細胞の新規機能の探索とその調節機序の解明

2014 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 25860147
• 研究機関: 自治医科大学
• 研究代表者: 塚田 岳大 自治医科大学, 医学部, 講師 (50596210)
• 研究期間 (年度): 2013-04-01 – 2015-03-31
• キーワード: 下垂体前葉 / 濾胞星状細胞 / 3次元培養 / 細胞外マトリックス / コラーゲン / ラミニン / 組織構築 / TGFbeta

研究実績の概要

本研究の目的は、平成23年度に採択された若手研究B（課題番号：23790233）の補助のもと確立したラット下垂体前葉細胞の3次元培養法（Acta Histochem Cytochem 46: 121-127, 2013. 平成26年度に論文賞受賞）を用いて、下垂体の組織構築における濾胞星状細胞の役割を解き明かすことにある。
平成25年度の実験で、濾胞星状細胞がゴナドトロフで合成される基底膜成分ラミニンの放出に重要であることを明らかにした。平成26年度は、そのデータをまとめた論文が国際誌に受理された（Acta Histochem Cytochem, 47: 239-245, 2014）。
また、これまでの研究により、濾胞星状細胞が周皮細胞のコラーゲン合成に関与していることがわかっている。平成26年度は、その詳しい分子メカニズムを調べた。本研究では、線維化サイトカインとして知られているTransforming growth factor beta（TGFb）に着目した。RT－PCR法とin situ hybridization法により、濾胞星状細胞にTGFb2が、周皮細胞にその受容体であるTGFBR-IIが発現していることを明らかにした。また、3次元培養したラット下垂体前葉細胞にTGFb2添加したところ、コラーゲン合成量が増加し、TGFb受容体の阻害剤でその合成が抑えられることも明らかにした。さらに、TGFb2の細胞内シグナル分子であるSmad2がTGFb2受容後、周皮細胞の核内に移行することも確認した。これらの結果から、周皮細胞のコラーゲン合成に濾胞星状細胞で合成されるTGFb2が関与することが示唆された。現在、これらのデータをまとめ、論文を作成している。上記の研究データは、第87回日本内分泌学会、第16回国際内分泌学会、第29回日本下垂体研究会、第55回日本組織細胞化学会、第120回日本解剖学会で発表を行った。

研究成果

• [雑誌論文] Expression of the heparin-binding growth factor midkine and its receptor, Ptprz1, in adult rat pituitary (2015)
  • 著者名/発表者名: Fujiwara K, Horiguchi K, Maliza R, Tofrizal A, Batchuluun K, Ramadhani D, Syaidah R, Tsukada T, Azuma M, Kikuchi M, and Yashiro T
  • 雑誌名: Cell Tissue Res 巻: 359 ページ: 909-914
  • DOI: 10.1007/s00441-014-2073-8
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Histochemical analysis of laminin α chains in diethylstilbestrol-induced prolactinoma in rats (2015)
  • 著者名/発表者名: Ramadhani D, Tofrizal A, Tsukada T, and Yashiro T
  • 雑誌名: Acta Histochem Cytochem 巻: 48 ページ: 69-73
  • DOI: 10.1267/ahc.14067
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Isolation of dendritic cell-like S100β-positive cells in rat anterior pituitary gland (2014)
  • 著者名/発表者名: Horiguchi K, Fujiwara K, Yoshida S, Higuchi M, Tsukada T, Kanno N, Yashiro T, Tateno K, Osako S, Kato T, and Kato Y
  • 雑誌名: Cell Tissue Res 巻: 357 ページ: 301-308
  • DOI: 10.1007/s00441-014-1817-9
  • 査読あり
• [雑誌論文] Expression of chemokine CXCL10 in dendritic cell-like S100β-positive cells in rat anterior pituitary gland (2014)
  • 著者名/発表者名: Horiguchi K, Fujiwara K, Higuchi M, Yoshida S, Tsukada T, Ueharu H, Chen M, Hasegawa R, Takigami S, Osako S, Yashiro T, Kato T, and Kato Y
  • 雑誌名: Cell Tissue Res 巻: 357 ページ: 757-765
  • DOI: 10.1007/s00441-014-1864-2
  • 査読あり
• [雑誌論文] In situ hybridization analysis of the temporospatial expression of the midkine/pleiotrophin family in rat embryonic pituitary gland (2014)
  • 著者名/発表者名: Fujiwara K, Maliza R, Tofrizal A, Batchuluun K, Ramadhani D, Tsukada T, Azuma M, Horiguchi K, Kikuchi M, and Yashiro T
  • 雑誌名: Cell Tissue Res 巻: 357 ページ: 337-344
  • DOI: 10.1007/s00441-014-1875-z
  • 査読あり
• [雑誌論文] Phosphorylation of Tropomodulin1 Contributes to the Regulation of Actin Filament Architecture in Cardiac Muscle (2014)
  • 著者名/発表者名: Bliss KT, Tsukada T, Novak SM, Dorovkov MV, Shah S, Nworu C, Kostyukova AS, and Gregorio CC
  • 雑誌名: FASEB J 巻: 28 ページ: 3987-3995
  • DOI: 10.1096/fj.13-246009
  • 査読あり
• [雑誌論文] Changes in laminin chain expression in pre- and postnatal rat pituitary gland (2014)
  • 著者名/発表者名: Ramadhani D, Tsukada T, Fujiwara K, Azuma M, Kikuchi M, and Yashiro T
  • 雑誌名: Acta Histochem Cytochem 巻: 47 ページ: 231-237
  • DOI: 10.1267/ahc.14031
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Folliculostellate cells are required for laminin release from gonadotrophs in rat anterior pituitary (2014)
  • 著者名/発表者名: Tsukada T, Fujiwara K, Horiguchi K, Azuma M, Ramadhani D, Tofrizal A, Batchuluun K, Maliza R, Syaidah R, Kikuchi M, and Yashiro T
  • 雑誌名: Acta Histochem Cytochem 巻: 47 ページ: 239-245
  • DOI: 10.1267/ahc.14036
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [学会発表] Transforming growth factor beta 2 from folliculostellate cells induces collagen synthesis in pericytes of rat anterior pituitary gland (2015)
  • 著者名/発表者名: Tsukada T, Ramadhani D, Syaidah R, Yashiro T
  • 学会等名: 第120回日本解剖学会
  • 発表場所: 兵庫
  • 年月日: 2015-03-21 – 2015-03-23
• [学会発表] Identification of tissue inhibitors of metalloproteinases-expressing cells in rat anterior pituitary gland (2014)
  • 著者名/発表者名: Azuma M, Batchuluun K, FujiwaraK, Tsukada T, Kikuchi M, Yashiro T
  • 学会等名: 第39回日本比較内分泌学学会
  • 発表場所: 愛知
  • 年月日: 2014-11-07 – 2014-11-09
• [学会発表] Immunohistochemical analysis of laminin isoform expression in diethylstilbestrol (DES)-treated rat as prolactinoma model (2014)
  • 著者名/発表者名: Ramadhani D, Tsukada T, Syaidah R, Yashiro T
  • 学会等名: 第18回日本内分泌病理学会
  • 発表場所: 東京
  • 年月日: 2014-11-01 – 2014-11-02
• [学会発表] 下垂体前葉内S100タンパク質陽性細胞から分泌されるケモカインCXCL10のIFN-γによる制御 (2014)
  • 著者名/発表者名: 堀口幸太郎、吉田彩舟、藤原研、樋口雅司、塚田岳大、加藤たか子、舘野こずえ、長谷川瑠美、瀧上 周、大迫俊二、屋代 隆、加藤幸雄
  • 学会等名: 第41回日本神経内分泌学会
  • 発表場所: 東京
  • 年月日: 2014-10-31 – 2014-11-02
• [学会発表] ラット下垂体前葉におけるTGFb2の作用とTGFb受容体の組織内局在 (2014)
  • 著者名/発表者名: 塚田岳大、藤原研、屋代隆
  • 学会等名: 第55回日本組織細胞化学会
  • 発表場所: 長野
  • 年月日: 2014-09-27 – 2014-09-28
• [学会発表] Alteration of laminin isoform expression in pituitary adenoma of diethylstilbestrol (DES)-treated rat (2014)
  • 著者名/発表者名: Ramadhani D, Tsukada T, and Yashiro
  • 学会等名: 第29回日本下垂体研究会
  • 発表場所: 東京
  • 年月日: 2014-08-08 – 2014-08-19
• [学会発表] 樹状細胞様S100タンパク質陽性細胞から分泌されるケモカインCXCL10の機能解析 (2014)
  • 著者名/発表者名: 堀口幸太郎、吉田彩舟、藤原研、樋口雅司、塚田岳大、加藤たか子、舘野こずえ、長谷川瑠美、瀧上 周、大迫俊二、屋代 隆、加藤幸雄
  • 学会等名: 第29回日本下垂体研究会
  • 発表場所: 東京
  • 年月日: 2014-08-08 – 2014-08-10
• [学会発表] ラット下垂体前葉における濾胞星状細胞と周皮細胞の相互作用： Transforming growth factor beta2を介したコラーゲン合成 (2014)
  • 著者名/発表者名: 塚田岳大、Ramadhani Dini、藤原研、矢田部恵、喜幸富、屋代隆
  • 学会等名: 第29回日本下垂体研究会
  • 発表場所: 東京
  • 年月日: 2014-08-08 – 2014-08-10
• [学会発表] Folliculostellate Cells Are Required for Laminin Release from Gonadotrophs in Rat Anterior Pituitary Gland (2014)
  • 著者名/発表者名: Tsukada T, Azuma M, Ramadhani D, Batchuluun K, and Yashiro T
  • 学会等名: 16th International Congress of Endocrinology and The Endocrine Society’s 96th Annual Meeting & Expo
  • 発表場所: Chicago, IL, USA
  • 年月日: 2014-06-21 – 2014-06-24
• [学会発表] 下垂体前葉細胞のクロストーク―三次元培養法を用いた新たなアプローチ― (2014)
  • 著者名/発表者名: 塚田岳大、屋代隆
  • 学会等名: 第87回日本内分泌学会
  • 発表場所: 福岡
  • 年月日: 2014-04-24 – 2014-04-26
  • 招待講演
• [図書] “B-type natriuretic peptide”, “C-type natriuretic peptides” and “Ventricular natriuretic peptide” in Handbook of Hormones: Comparative and General Endocrinology (2015)
  • 著者名/発表者名: Tsukada T
  • 総ページ数: 未定
  • 出版者: Elsevier
• [図書] "Evolution of Natriuretic Peptide System" in Reference Module in Biomedical Research (2014)
  • 著者名/発表者名: Takei Y and Tsukada T
  • 総ページ数: 6
  • 出版者: Elsevier