研究課題
若手研究(B)
軟骨や骨組織の破壊により不可逆的な機能障害を生じる関節リウマチにおいて、軟骨の破壊には軟骨細胞や線維芽細胞様滑膜細胞が、骨の破壊には破骨細胞が主に関わると考えられているが不明な点も多い。破骨細胞と同様の多核巨細胞の形態を示し軟骨周囲に存在する破軟骨細胞は、その存在する位置から軟骨の分解に関わると考えられているが、その特性は明らかではない。本研究では関節リウマチ病変部の多核巨細胞の特徴について免疫染色等で解析するとともに、細胞株を用いて病変部で認められるような性質をもつ多核巨細胞への分化条件を検討した。免疫染色の結果、病変部の軟骨近傍の多核巨細胞において、軟骨の細胞外基質を構成するプロテオグリカンのアグリカンを分解する酵素であるa disintegrin and metalloproteinase with thrombospondin-like motifs (ADAMTS)-4およびADAMTS-5の発現が認められた。また、これらの細胞は破骨細胞のマーカーであるtartrate-resistant acid phosphatase (TRAP) 染色陽性であった。マウス単球細胞株であるRAW264.7を破骨細胞に分化させる際に様々なサイトカインを添加して培養した結果、TNF-α添加によりADAMTS-4のmRNAの発現が亢進することやTGF-β添加によりADAMTS-5のmRNAの発現が顕著に亢進することがreal-time PCRにより明らかになった。また、これらの条件でもTRAPの発現量はコントロールに比べ減少せず、TNF-α添加ではTRAPの発現量は増加していた。これらのことから、関節リウマチにおいて、通常の破骨細胞とは異なり軟骨を分解する性質を持つ破軟骨細胞への分化が誘導されること、この細胞が軟骨の分解と骨吸収に働き関節破壊に関与することが示唆された。
2: おおむね順調に進展している
関節リウマチ病変部の免疫染色とTRAP染色の実験を行った。当初の実施計画を変更し、ヒトの細胞培養実験前に、破骨細胞研究に用いられることの多いマウス細胞株RAW264.7を用いて、ADAMTSS-4, -5の発現に影響するサイトカインの検討を行った。
RAW264.7分化におけるmRNAの発現の変化を解析できたため、蛋白質の発現量の変化の解析を行う。ヒトの細胞培養実験を行い、RAW264.7を用いて行った実験と同様の発現の変化が認められるかを明らかにする。
細胞培養用の試薬の一部の購入が次年度になったため。学会出張の際に科研費を使用しなかったため。RAW264.7およびヒト細胞培養を行い、分化誘導するためのサイトカインや培地の購入にあてる。また、mRNAおよび蛋白質の発現量の変化を調べるため、real-time PCR用の酵素やプローブおよびウエスタンブロット用の抗体やメンブレンの購入に使用する。
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ページ: 印刷中
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