研究課題
若手研究(B)
ファブリー病は、リソソーム性加水分解酵素であるα-ガラクトシダーゼA（GLA）の活性低下により、基質である糖脂質が細胞に蓄積する遺伝病である。我々は、ファブリー病の新規酵素補充療法薬の候補酵素として、α-N-アセチルガラクトサミニダーゼ（NAGA）の基質認識部位のアミノ酸残基を置換し、GLA活性を有するようにした改変型NAGAを開発した。本研究では、改変型NAGAと同時投与することで改変型NAGAを安定化し、その治療効果を増大させる化合物を同定し、その効果を解析することを目的としている。本年度は、実験で使用する精製した改変型NAGAを得るために、CHO細胞を用いた改変型NAGAの生産系を改良し、その生産効率を向上させた。さらに、カラムクロマトグラフィーを用いて精製することで、翌年度以降に必要となる精製した改変型NAGAを十分量得ることができた。続いて、改変型NAGAの阻害剤を探索した。阻害活性を示した化合物については、阻害定数を算出した。
2: おおむね順調に進展している
翌年度以降必要となる精製酵素を十分量得ることができた。また、改変型NAGAの阻害剤を同定し、その性状を解析することができた。そのため、おおむね順調に進展している。
in vitroで改変型NAGAを安定化する阻害剤を同定する。続いて、同定した阻害剤を改変型NAGAと同時に細胞に添加することで、改変型NAGAの治療効果が向上されるかを解析する。効果が確認できた場合、マウスに改変型NAGAと阻害剤を同時に投与し、血中や臓器中で改変型NAGAが安定化されるか解析する。
おおむね予定通りに使用したが、当初予定していたスクリーニング用の化合物を譲り受けることができたため、その購入費用分、25年度は繰越金が発生した。主に、細胞培養に関わる経費、動物実験に関わる経費、生化学的分析を行うための経費に充てる予定である。また、研究成果発表のための学会参加費や旅費に使用する予定であり、当初計画から大きな変更はない。
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