基質類似体同時投与による酵素製剤の増強作用

2015 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 25860399
• 研究機関: 明治薬科大学
• 研究代表者: 月村 考宏 明治薬科大学, 薬学部, 助教 (50632783)
• 研究期間 (年度): 2013-04-01 – 2016-03-31
• キーワード: 酵素製剤 / 基質類似体 / リソソーム病

研究実績の概要

ファブリー病は、α-ガラクトシダーゼA（GLA）の活性低下により、基質である糖脂質が蓄積する遺伝病である。我々は、ファブリー病の新規酵素補充療法薬の候補として、α-N-アセチルガラクトサミニダーゼ（NAGA）の基質認識部位のアミノ酸を置換し、GLA活性を有するようにした改変型NAGAの開発を行っている。本研究では、改変型NAGAと同時投与することで改変型NAGAを安定化し、その治療効果を増大させる化合物を同定し、その効果を解析することとした。そして、昨年度までに、改変型NAGAに対して阻害作用を示す化合物のうち、細胞に改変型NAGAと同時添加することで、改変型NAGA単独添加に比べ、その細胞内取り込み量が約1.5倍増加する化合物を選出している。
本年度は、選出した化合物と改変型NAGAをモデルマウスに単回同時投与し、経時的（1時間後～5日後）に血中及び臓器中（肝臓、腎臓、心臓）の改変型NAGAの酵素活性を測定することで、血中及び臓器中で改変型NAGAが化合物により安定化されているか評価した。その結果、改変型NAGA単独投与と、化合物と改変型NAGAの同時投与の2群間で優位な差は確認されなかった。このことから、選出した化合物による改変型NAGAの安定化効果は、本投与条件では無いと考えられた。
このことから、本年度は、選出した化合物をポジティブコントロールとして用いることで、今後新規候補化合物を探索する際に役立つ新規スクリーニング法として、サーマルシフトアッセイ法を用いてTm値を測定する系を構築した。本方法は、多検体を同時に測定できるとともに、従来選出することが難しかった阻害作用を示さないが改変型NAGAを安定化する化合物を選出することを可能とするため、1次スクリーニング法として有用となる可能性がある。また本方法は、他の酵素製剤を安定化する化合物のスクリーニングにも応用可能である。

研究成果

• [雑誌論文] Distributions of globotriaosylceramide isoforms, and globotriaosylsphingosine and its analogues in an α-Galactosidase A knockout mouse, a model of Fabry disease (2015)
  • 著者名/発表者名: Sueoka H., Aoki M., Tsukimura T., Togawa T., Sakuraba H.
  • 雑誌名: PLoS One 巻: 10 ページ: e0144958
  • DOI: 10.1371/journal.pone.0144958. eCollection 2015
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Clinical and biochemical investigation of male patients exhibiting membranous cytoplasmic bodies in biopsied kidney tissues － A pitfall in diagnosis of Fabry disease (2015)
  • 著者名/発表者名: Sakuraba H., Tsukimura T., Tanaka T., Togawa T., Takahashi N., Mikami D., Wakai S., Akai Y.
  • 雑誌名: J. Nephropathol. 巻: 4 ページ: 91-96
  • DOI: 10.12860/jnp.2015.17
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Rapid immunochromatographic detection of serum anti-α-Galactosidase A antibodies in Fabry patients after enzyme replacement therapy (2015)
  • 著者名/発表者名: Nakano S., Tsukimura T., Togawa T., Ohashi T., Kobayashi M., Takayama K., Kobayashi Y., Abiko H., Satou M., Nakahata T., Warnock D.G., Sakuraba H., Shibasaki F.
  • 雑誌名: PLoS One 巻: 10 ページ: e0128351
  • DOI: 10.1371/journal.pone.0128351. eCollection 2015
  • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著 / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Nano-LC-MS/MS for quantification of Lyso-Gb3 and its analogues reveals a useful biomarker for Fabry disease (2015)
  • 著者名/発表者名: Sueoka H., Ichihara J., Tsukimura T., Togawa T., Sakuraba H.
  • 雑誌名: PLoS One 巻: 10 ページ: e0127048
  • DOI: 10.1371/journal.pone.0127048. eCollection 2015
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] A heterozygous female with Fabry disease due to a novel alpha-galactosidase A mutation exhibits a unique synaptopodin distribution in vacuolated podocytes (2015)
  • 著者名/発表者名: Takahashi N., Yokoi S., Kasuno K., Kogami A., Tsukimura T., Togawa T., Saito S., Ohno K., Hara M., Kurosawa H., Hirayama Y., Kurose T., Yokoyama Y., Mikami D., Kimura H., Naiki H., Sakuraba H., Iwano M.
  • 雑誌名: Clin. Nephrol. 巻: 83 ページ: 301-308
  • DOI: 10.5414/CN108317
  • 査読あり
• [雑誌論文] Thirty-seven amino acids and three related nitrogen compounds in human seminal plasma: multivariate analyses reveal strong correlations among asparagine, glutamine, and ammonia with sperm parameters (2015)
  • 著者名/発表者名: Katayama M., Kaneko S., Tsukimura T., Takamatsu K., Togawa T.
  • 雑誌名: Indian J. App. Res. 巻: 5 ページ: 199-203
  • DOI: 10.15373/2249555X
  • 査読あり
• [学会発表] Anti-α-galactosidase A antibodies and serum-mediated inhibition in Fabry disease (2016)
  • 著者名/発表者名: Tsukimura T., Shibasaki F., Shigenaga M., Togawa T., Sakuraba H.
  • 学会等名: 12th Annual Lysosomal disease network WORLD Symposium 2016
  • 発表場所: Manchester Grand Hyatt San Diego（USA, San Diego）
  • 年月日: 2016-02-29 – 2016-03-04
  • 国際学会
• [学会発表] Comparative study on α-galactosidase A (GLA) genetic variants with unknown clinical significance (2016)
  • 著者名/発表者名: Sakuraba H., Togawa T., Tsukimura T., Saito S., Ohno K
  • 学会等名: 12th Annual Lysosomal disease network WORLD Symposium 2016
  • 発表場所: Manchester Grand Hyatt San Diego（USA, San Diego）
  • 年月日: 2016-02-29 – 2016-03-04
  • 国際学会
• [学会発表] Measurement of glycosphingolipids by means of tandem mass spectrometry and evaluation of them as a biomarker of Fabry disease (2016)
  • 著者名/発表者名: Togawa T., Kodama T., Tsukimura T., Kawashima I., Tanaka T., Shiga T., Sato A., Sakuraba H.
  • 学会等名: 12th Annual Lysosomal disease network WORLD Symposium 2016
  • 発表場所: Manchester Grand Hyatt San Diego（USA, San Diego）
  • 年月日: 2016-02-29 – 2016-03-04
  • 国際学会
• [学会発表] 酵素製剤に対する抗体を産生したファブリー病患者の血清は酵素製剤の活性を阻害する (2015)
  • 著者名/発表者名: 重永 雅志、月村 考宏、佐藤 温子、芝崎 太、兎川 忠靖、櫻庭 均
  • 学会等名: 第38回日本分子生物学会年会／第88回日本生化学会大会 合同大会
  • 発表場所: 神戸ポートアイランド（兵庫県神戸市）
  • 年月日: 2015-12-01 – 2015-12-04
• [学会発表] 酵素補充療法を受けたファブリー病患者における抗α-ガラクトシダーゼA抗体産生と酵素活性阻害作用 (2015)
  • 著者名/発表者名: 重永 雅志、月村 考宏、佐藤 温子、芝崎 太、兎川 忠靖、櫻庭 均
  • 学会等名: 第57回日本先天代謝異常学会／第13回アジア先天代謝異常症シンポジウム
  • 発表場所: 大阪国際会議場（大阪府大阪市）
  • 年月日: 2015-11-12 – 2015-11-16
• [学会発表] 遅発型ファブリー病の原因変異vs機能的多型 (2015)
  • 著者名/発表者名: 月村 考宏、田中 利絵、大塚 智子、志賀 智子、末岡 英明、芝崎 太、兎川 忠靖、櫻庭 均
  • 学会等名: 第57回日本先天代謝異常学会／第13回アジア先天代謝異常症シンポジウム
  • 発表場所: 大阪国際会議場（大阪府大阪市）
  • 年月日: 2015-11-12 – 2015-11-14
• [学会発表] Fabry病モデルマウス腎臓に蓄積する糖脂質の特徴と酵素補充療法による分解効果 (2015)
  • 著者名/発表者名: 兎川 忠靖、児玉 敬、月村 考宏、川島 育夫、志賀 智子、田中 利絵、櫻庭 均
  • 学会等名: 第57回日本先天代謝異常学会／第13回アジア先天代謝異常症シンポジウム
  • 発表場所: 大阪国際会議場（大阪府大阪市）
  • 年月日: 2015-11-12 – 2015-11-14
• [学会発表] タンデムマス測定法による血漿lyso-Gb3の高感度測定とそのファブリー病バイオマーカーとしての評価 (2015)
  • 著者名/発表者名: 兎川 忠靖、田中 利絵、志賀 智子、大塚 智子、佐藤 温子、児玉 敬、月村 考宏、櫻庭 均
  • 学会等名: 第20回日本ライソゾーム病研究会
  • 発表場所: 東京慈恵医科大学（東京都港区）
  • 年月日: 2015-10-02 – 2015-10-03
• [学会発表] 男性不妊患者精漿中の金属およびアミノ酸の解析: 加齢の影響 (2015)
  • 著者名/発表者名: 片山昌勅、月村考宏、高松潔、兼子智、兎川忠靖
  • 学会等名: 第59回日本薬学会 関東支部大会
  • 発表場所: 日本大学（千葉県船橋市）
  • 年月日: 2015-09-12 – 2015-09-12
• [学会発表] High risk screening for Fabry disease in Japan (2015)
  • 著者名/発表者名: Tsukimura T., Togawa T., Sakuraba H.
  • 学会等名: The 3rd Asian Congress for Lysosomal Storage Disease Screening
  • 発表場所: 品川プリンスホテル（東京都港区）
  • 年月日: 2015-06-19 – 2015-06-19
  • 国際学会 / 招待講演
• [学会発表] Fabry病患者由来iPS細胞を用いた新規疾患モデルの作製 (2015)
  • 著者名/発表者名: 那須 誠、天久 朝廷、横路 三有紀、月村 考宏、沖田 圭介、赤井 靖宏、櫻庭 均、 深水 圭、奥田 誠也、長船 健
  • 学会等名: 第58回日本腎臓学会学術総会
  • 発表場所: 名古屋国際会議場（愛知県名古屋市）
  • 年月日: 2015-06-05 – 2015-06-07