| 研究課題/領域番号 |
25860470
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| 研究機関 | 川崎医科大学 |
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研究代表者 |
武井 直子 川崎医科大学, 医学部, 助教 (00509276)
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| 研究期間 (年度) |
2013-04-01 – 2016-03-31
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| キーワード | 石綿 / CTL / ケモカイン受容体 / 中皮腫 |
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| 研究実績の概要 |
石綿曝露は悪性中皮腫や肺癌を引き起こす。石綿の発癌作用はよく知られているが、癌疾患の抑制に働く抗腫瘍免疫機能への石綿曝露影響は不明な部分が多い。抗腫瘍免疫において細胞傷害性T細胞（CTL）は特異的に腫瘍細胞を攻撃する。申請者はこれまでに、石綿曝露がヒトCTLの分化を抑制することを見出した。腫瘍細胞が効果的に排除されるためには、｢CTLが分化すること｣だけでなく、「分化後のCTL亜集団（Effector，TEM，TEMRA，TCM）が機能を持続させること」、「CTLの遊走（腫瘍部位への遊走とリンパ節への停留）が適切であること」が重要である。CTL亜集団は、ケモカイン受容体とCD45RAの発現動態により分類できる。そこで、本研究の目的は分化後CTLを4亜集団に分類・単離したのち、各CTL亜集団の機能維持と遊走活性に対する石綿曝露影響を調べることである。
平成26年度は、研究実施計画のうち、「3種類の分化後メモリーCTL亜集団（TCM, TEM, TEMRA）の分類・単離方法の確立」に取り組んだ。調整した末梢血単核球（PBMC）を放射線照射アロPBMCと1週間混合培養し、アロ標的特異的CTL分化誘導を行い、分化誘導7日目のPBMCを回収した。回収した細胞をCD8、CD45RA、及びCCR7に対する各種蛍光標識抗体で染色し、フローサイトメトリーを用いて3種類のメモリーCTL亜集団への分類を試みた。分類手法を確立するためには、フローサイトメトリーの測定条件などの改良が必要であることがわかった。或いは、磁気ビーズを用いて、PBMCからCD8+T細胞を予め単離した後にCD45RAとCCR7に対する蛍光標識抗体で染色し、フローサイトメトリー解析を行う必要性も考えられる。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
平成26年度は、メモリーCTL亜集団の分類・単離方法の確立に向けて研究を進められていることや、本研究に関する研究成果を纏めた論文が国際誌に受理された一方で、育休取得の為に研究を一時中断したことから現在までの達成度がやや遅れている。
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| 今後の研究の推進方策 |
次年度は、3種類の分化後メモリーCTL亜集団（TCM, TEM, TEMRA）の分類・単離方法を改良し、分化後Effector CTLとあわせて、3種類の分化後メモリーCTL亜集団の機能維持と遊走活性への石綿曝露影響を調べる予定である。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
育休取得の為、研究を一時中断したことにより、研究試薬などの消耗品の研究費の支出が少なかったことや、予定していた各種国内・国際学会出張を行わなかったので、次年度使用額が生じた。
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| 次年度使用額の使用計画 |
上記理由により、科学研究費助成事業の期間延長を申請し承認されたので、次年度使用額が生じた研究費については、細胞培養を中心に、細胞培養液、牛胎仔血清、培養プレート、及び蛍光標識抗体などの研究試薬等の研究経費として使用する計画を立てている。また、研究成果は、国内・国際学会などでの報告に加えて、論文に纏めて海外雑誌に投稿・誌上発表するため、出張費、論文校閲費、及び論文印刷費が必要である。
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