研究課題
若手研究(B)
Ovarian cancer G-protein-coupled receptor 1;OGR1はプロトン感知性受容体として報告されている。炎症局所では細胞外pHが低下していると考えられる気管支喘息においてOGR1の機能を解析した。卵白アルブミンと水酸化アルミニウムゲルの腹腔内投与、卵白アルブミン吸入による感作によって作製した喘息モデルを用い検討した。メサコリンに対する気道抵抗（無麻酔下noninvasive（Penh）法,麻酔下invasive法）では、OGR1野生型に比してOGR1KOマウスでは減弱が認められた。気管支肺胞洗浄液（BALF）中の総細胞数、好酸球、リンパ球数、杯細胞の過形成の程度もKOマウスで低下していた。Th2系サイトカインであるIL-4,IL-5,IL-13の減少を認めた。これらの結果から病態の鍵となる樹状細胞に着目し、OGR1の役割について解析を行った。マウス骨髄単球を採取し、GM-CSF,IL-4下で培養を行い、樹状細胞を作製した。樹状細胞にはmRNAレベルでOGR1が発現していることが分かった。樹状細胞の重要な機能の一つである遊走能について検討した。OGR1WTマウスもしくはKOマウス骨髄由来の樹状細胞を作製し、気管内に移植後、OVAによりチャレンジを行うと、KOマウス骨髄由来樹状細胞移植群では気道過敏性、気道炎症の減弱が認められた。移植する樹状細胞をCFSEによりラベルし、気管内移植後、傍気管リンパ節を採取して遊走する樹状細胞数をフローサイトメトリー法で検討した。傍気管支リンパ節への遊走能はKO由来樹状細胞群で低下を認めた。以上より、OGR1KO喘息モデルマウスにおいて気道過敏性と気道炎症が抑制され、その機序として樹状細胞が関与している可能性が示唆された。
2: おおむね順調に進展している
OGR1ファミリー欠損マウスを用いた気管支喘息モデルのin vivo解析については終了しており、現在はマウス骨髄由来樹状細胞を用いた抗原提示能のin vitro解析を行っている。現在のところ遊走能について結果を得ているが、樹状細胞のその他の機能である抗原取り込み、プロセシング能、Ｔ細胞への抗原提示能について解析していく予定である。
樹状細胞に発現しているOGR1の機能解析を進めるとともに、OGR1を介した免疫応答を調節するシグナル伝達経路について解明する。OGR1はGq タンパク質共役型受容体であるため、Gq タンパク質機能抑制剤を用いて、OGR1を介した免疫応答がGqタンパク質を介したものであることを確認する。また、他のシグナル伝達経路阻害剤を用いることで、さらに詳細にシグナル伝達経路の解析も行う。さらに、免疫応答に関わる細胞内のシグナル分子の活性 (カルシウム、cAMPなど) 変化も解析する。
樹状細胞の機能解析を進めているが、すべての解析が終了していないこと、既存の試薬などで解析が進められたこと、また大学内の共用施設を用いて研究を進められたことが理由である。樹状細胞の更なる機能解析のために、リンパ球など他の免疫担当細胞の分離、培養が必要となるため、これらの解析に使用したい。また、フローサイトメトリー法による表面マーカーの解析も進めるため、これらに必要な試薬を購入したい。
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PLOS one
巻: 8 ページ: e79985
10.1371/journal.pone.0079985. eCollection 2013.
