| 研究概要 |
本研究は筋萎縮性側索硬化症（ALS）の病態機序解明を目的とする．我々はALS罹患組織におけるRNA代謝の異常に注目し，mRNAのスプライシングに関連するsmall nuclear RNAs (snRNAs)が低下する事，およびsnRNAsの成熟に重要な核内小体，GEM小体がALS患者組織にて低下している事を既に見出している．本研究の目的はGEM小体減少の具体的機序を明らかにし，ALS病態生理の解明を進めることである.我々は平成25年度に培養細胞およびALS罹患組織にてGEM小体関連蛋白の定量を行ったのでこれを報告する．
siRNA法によるTDP-43発現抑制Hela細胞にてウェスタンブロット法，逆転写定量PCR法により解析を行った．逆転写定量PCR法の条件設定は国際的な実験ガイドラインに準じた．使用するRNAの品質は，バイオアナライザー2100を用いて確認し，内在性コントロールの設定に当たっては15種類の候補遺伝子の発現を計測し，内在性コントロール選定ソフト GeNorm を用いて設定した．その結果，複数種類のsiRNA プローブによるTDP-43発現抑制細胞それぞれで，GEM小体の主要構成蛋白質であるSMNおよび Gemin 3,6,8 蛋白質の発現低下を認めた．またSMN mRNAの発現量低下を認めた．これらの結果からは，TDP-43機能低下はSMN蛋白質の発現低下を介して，GEM小体数を低下させることが予想された．しかしALS罹患組織である脊髄，大脳皮質運動野での解析では，SMN mRNAは対照群と比較して有意な減少を呈さなかった．ALS罹患組織におけるGEM小体数の低下は，SMN蛋白の直接的な低下のみでは説明が困難である．これに関しては我々は核内でのGEM小体の形成，安定化にTDP-43蛋白質が寄与する可能性を考えている．
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