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PNHの病態や骨髄不全状態における微少PNH血球の役割は明らかにされていない。これらを解明するためにPNH血球からPNHクローンの細胞をsortingし、リプログラミングを行いPNH-iPS細胞を樹立することにより、病態解明を行うことを目的とした。前年度に引き続き、古典的PNH症例の骨髄血及び末梢血からiPS 細胞の樹立を試みた。
PNH症例の骨髄細胞の前培養を2日間SCF、IL3、GM-CSF、TPO添加して行った。その後、センダイウイルスのOct4、Sox2、KLF4、L-myc、Nanog、Lin28、Glis1を遺伝子導入し、iPS様コロニーを作成した。免疫染色でSSEA4、Tra1-60陽性であり、stem cell geneの発現も確認した。疾患特有の性質を保持しているか確認する為、10T1/2の共培養系による血球分化を行った。iPSから誘導されたCD34陽性細胞は、CD55陰性CD59陰性であり、樹立されたiPSは、PNHクローンではなく、正常クローンと考えられた。疾患由来iPSを樹立する際に、レトロウイルスやセンダイウイルスでiPS化を行うと、疾患細胞からは効率が悪く、正常クローンのみ樹立されることが他の血液疾患においても認められており、同様の現象と考えられる。
PNH細胞のリプログラミング効率を改善する為、エピゾーマルベクター（Oct4、Sox2、KLF4、L-myc、Nanog、Lin28、shp53）を用いてiPSの樹立を試みた。末梢血単核球を分離し、CD13陽性CD55陰性CD59陰性細胞に対して、エピゾーマルベクターを用いてiPSの樹立を施行した。しかしながら、CD13陽性CD55陰性CD59陰性のPNH細胞からiPS様のコロニーの樹立は出来なかった。PNH血球からのiPS細胞樹立にはこれまで行った方法では難しい要因があると考えている。
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