| 研究課題/領域番号 |
25860795
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| 研究機関 | 日本医科大学 |
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研究代表者 |
近藤 麻加 日本医科大学, 医学部, 助教 (80468769)
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| 研究期間 (年度) |
2013-04-01 – 2016-03-31
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| キーワード | 骨髄異形成症候群 / CD25 / IL2Rα / 腫瘍免疫 |
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| 研究実績の概要 |
(1) 骨髄異形成症候群（MDS）細胞株4種類（F-36P、SKM-1、MDS-L、HNT34）のCD25発現をFCM法で解析し、MDS-LにCD25発現を認めた。(2) Human elongation factor 1 alpha (EF1α)のプロモーターを用いたIL-2Rα発現ベクター(pEF1-IL-2Rα)を作成し、エレクトロポレーション法によりIL-2Rα陰性F-36P細胞へ遺伝子導入を行い、IL-2Rα発現F-36P細胞22クローンを樹立した。(3)2つのクローンのIL-2Rα+ F-36P細胞において、フローサイトメトリー（FCM）法を用いてPropidium iodide (PI)染色による細胞周期、BrdU取り込み、Ki-67発現を解析した。しかし、IL-2Rα+ F-36P細胞は、コントロール細胞と細胞増殖能には差がなかった。(4)IL-2Rα+ F-36P細胞にMDS治療薬であるAra-Cあるいはazacitidineを添加培養し、FCMを用いてアポトーシス細胞の割合を解析した。Azacitidine添加では細胞のアポトーシスは起こらなかったが、AraC添加では濃度依存的にIL-2Rα発現細胞のアポトーシスが誘導された。しかし、IL-2Rα発現細胞とコントロール細胞の薬剤感受性は同じであった。(5)IL-2Rα+ F-36P細胞にIL-2を添加し、細胞増殖能を解析した。IL-2添加による腫瘍増殖能の変化は認めなかった。(6)MDSまたはMDSから白血病化した患者の骨髄液または末梢血から単核球分離を行い、CD34陽性芽球上のCD25発現をFCM法で解析した。11人中5人の患者でCD25発現を認めた。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
CD25陽性細胞の細胞周期や薬剤耐性に陰性細胞との差を認めず確認検査に時間を要した。MDS患者の検体収集に時間を要し、実験進行が遅延した。
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| 今後の研究の推進方策 |
(1) MDS、MDS白血病化患者検体における芽球上CD25発現の解析を蓄積し、予後との関連を検討する。また、末梢血または骨髄液の単核球における制御T細胞（Treg）比率をFCM法にて解析し、血漿中の可溶性IL-2RαとTregとの関係性について検討する。
CD25は白血病幹細胞に発現する特異的分子として注目されており、MDS細胞株および患者検体においても幹細胞、Lin(-)CD34(+)CD38(-)分画におけるCD25の発現を解析する。(2) MDS患者検体におけるCD25陽性芽球について細胞増殖能や薬剤感受性をフローサイトメトリー法により検討する。また、健常CD4+ naive T細胞と共培養を行いTregの誘導を解析する。(3) MDS細胞株よりAraC耐性株を作成する。耐性株においてCD25発現の有無を調べる。CD25発現を認めれば、CD25陽性細胞分画においてPropidium iodide (PI)染色法による細胞周期、BrdU取り込み量、Ki-67の発現を解析し、陰性細胞分画と比較を行う。
以上の結果をふまえMDS患者におけるCD25陽性細胞の細胞的特徴および予後に与える影響を検討する。
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