|
平成27年度までに収集しえたリケッチア疑い患者の検体から抽出したDNAを用いてリケッチア感染症の迅速診断及び病原体の同定を行った。
その結果日本紅斑熱11例、ツツガムシ病5例の計13例を同定しえた。ブラジル紅斑熱疑いの症例もあったが諸般の事情から同定にはいたらなかった。
これらについてLoop mediated isothermal amplification (LAMP)を用いた検査系にて感度・特異度を調べた。具体的にはツツガムシ病については、既報告の文献にしたがってO. tsutsugamushiの16k-Da heat shock protein GroEL遺伝子をターゲットとしたプライマーを使用し、日本紅斑熱に関してはR.japonicaの17kDa抗原遺伝子をターゲットに新規LAMPプライマーを作成して検証した。新規プライマーはLAMP設計支援ソフトウェア：Primer Explorer(https://primerexplorer.jp/)を用いて行った。
その結果、日本紅斑熱症例のDNAを用いたLAMPで全例陽性反応が得られ、検査時間に要した時間も30分～1時間程度であった。抽出DNA検体が血液検体では陽性反応に時間を要したが、痂皮検体からは比較的短時間で陽性反応が得られた。DNA抽出検体による検査結果判明までの時間に差が出ることに関して、再検討する必要がある。また、ツツガムシ病の検査系では、O. tsutsugamushiのShimokoshi型の検出ができなかった。既報のプライマーはShimokoshi型を想定していないプライマーであり、今後Shimokoshi型も検出可能なプライマーの作成を検討する必要がある。
|
