2013 年度実施状況報告書

ヒトES/iPS細胞への順遺伝学的手法適用による、白血病の新規発症機序解明

研究課題

研究課題/領域番号	25860856
研究種目	若手研究(B)
研究機関	京都大学
研究代表者	丹羽明京都大学, iPS細胞研究所, 助教 (20546999)
研究期間 (年度)	2013-04-01 – 2015-03-31
キーワード	白血病 / iPS細胞
研究概要	当初計画に沿って25年度は下記の成果を得た。【既知遺伝子導入】ClassI(Kit, PTPN11 etc. )、ClassII(AML1-MTG8, MLL-AF9 etc.)白血病遺伝子の誘導発現カセットを作成した。それらをトランスポゾンまたはゲノム編集技術を用いてiPS細胞に導入した。【造血分化】遺伝子挿入部位の配列およびDoxによる誘導発現能を確認し、マトリゲル上での２次元造血分化培養に供した。【網羅的遺伝子変異導入】培養で誘導したCD34陽性前駆細胞を分取し、未知関連遺伝子を網羅的に探索するためのshRNA発現ライブラリーをウィルスで導入した。【スクリーニング】白血病に相当する表現型を示す細胞を選択するため、in vitro（分化成熟異常・血球産生量の亢進・メチルセルロースアッセイでの自己複製）、in vivo（免疫不全マウスへの連続移植）の実験を一部開始した。
現在までの達成度 (区分)	現在までの達成度 (区分) 2: おおむね順調に進展している理由遺伝子導入カセットの作製および変異iPS細胞株の樹立がほぼスケジュール通りに進み、一部はH26年度計画を前倒しして表現型スクリーニングの開始も行っている
今後の研究の推進方策	表現型スクリーニングで選択された「iPS細胞由来白血病様細胞」を用い、shRNAもしくはトラップ位置のプロファイリングを行う。ピックアップされた遺伝子について、それが1st hitと関連して表現型に寄与したのか確認する必要があり、再びiPS細胞へreverse geneticに変異導入した後、1st hit存在・非存在下での両方の細胞の表現型の差を確認する。そうして絞り込まれた遺伝子群について発現パターンやインタラクトームの解析を行い、造血細胞の自己複製・分化・増殖・細胞死に関連するシグナル機構との関係を探索する。