研究課題
（1）研究目的：脊髄性筋萎縮症（SMA）は最も頻度の高い致死性の運動ニューロン病で、95%以上にSMN1遺伝子の欠失を認めている。現在、いくつかの薬剤の治験が海外ですでに開始されている。SMAモデルマウスを用いた動物実験では、早期に治療が開始されるほど効果が高い事が証明されており、発症前治療が今後重要となる。本研究では濾紙血を用いた高解像度融解曲線分析（HRMA）法によるSMN1遺伝子欠失迅速診断法を確立する。HRMAは多検体を短時間・低コストで解析できる。また、濾紙血を用いる事により、先天性代謝異常症マススクリーニングのシステムを利用可能である。この事から、乾燥濾紙血とHRMAを組み合わせたSMAのスクリーニング方法の開発を目指すことにした。（2）研究計画：次年度（最終年度）も、乾燥濾紙血（ワットマンFTA Eluteカード―GEヘルスケアバイオサイエンス社）から抽出したDNAを用いて、HRMA解析が可能であるか否かを検討した。この時に、乾燥濾紙血の室温・暗所での保存年数、PCR条件（プライマーの塩基配列、サイクル数）を再度検討した。（3）研究結果：乾燥濾紙血は、室温・暗所で、1～8年保管されていたものを用いた。煮沸法で乾燥濾紙血から抽出したDNAでは、通常のPCR条件（30サイクル）では、全例HRMA解析は出来なかった。しかし、PCRのサイクル数を通常の1.5倍まで（45サイクル）まで引き上げることで、乾燥濾紙血の90％はHRMA解析が可能になった。なお、この時に用いたプライマーセットは、Lefebvreらが1995年に報告したR111プライマーと541C770プライマーである。（4）結論：乾燥濾紙血は長期保存に耐え、また、そこから抽出したDNAはHRMA解析が可能な質と量を有する。したがって、乾燥濾紙血とHRMAを組み合わせたSMAのスクリーニングは可能である。
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Clinical Laboratory
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Brain Dev
巻: 36 ページ: 914-920
10.1111/ped.12018.
