研究課題
平成24年度までに集積したネマリンミオパチー患者に対しエキソーム解析を行った。乳児重症型の罹患同胞2人、非罹患1人、非罹患の両親5人から成る日本人1家系から新規の候補遺伝子KLHL40に複合ヘテロ接合性変異を同定した。さらに日本、アメリカ、フィンランド、オーストラリアの国際共同研究により、ネマリンミオパチー家系に対しKLHL40の遺伝子変異をスクリーニングした。143家系中28家系(19.6%)から19種類の遺伝子変異を同定した。日本人では創始者変異により本遺伝子変異の検出率はさらに高頻度であった(27.7%)。KLHL40のタンパク質の結晶構造モデルから、本変異は化学結合を不安定化させ、ドメイン構造の維持に影響を与えることが予測された。KLHL40は患者の筋線維でほとんど発現していなかったため、機能喪失が示唆された。モデル動物を用いた疾患検証のために、ゼブラフィッシュklhl40の機能を解析した。RT-PCRおよびin situ hybridizationからゼブラフィッシュklhl40はヒトと同様に筋肉、心臓および筋肉の前駆細胞に強く発現していることを認めた。ゼブラフィッシュ胚にモルフォリノアンチセンスオリゴを導入し、klhl40の機能を阻害させ、筋肉の発生に及ぼす影響を観察した。klhl40を機能阻害したゼブラフィッシュ胚では、筋線維間のギャップや走行異常が認められた。Z線の崩壊も観察されたため、KLHL40の機能喪失がネマリン小体の出現に関与することを推定した。また責任遺伝子が未同定のネマリンミオパチー症例において、2人の罹患同胞をもつ非罹患の母親にネマリンミオパチーの既知遺伝子であるACTA1の超低頻度体細胞モザイク変異を検出した。今後さらに責任遺伝子の同定を進めることで、ネマリンミオパチーの早期診断や新しい治療法の開発にも寄与することが期待される。
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http://www.yokohama-cu.ac.jp/univ/pr/press/130610.html