低分化型細胞株から独自方法で誘導した浮遊細胞塊の解析による癌幹細胞治療標的の検討

2014 年度 実施状況報告書

• 研究課題/領域番号: 25861192
• 研究機関: 山口大学
• 研究代表者: 恒富 亮一 山口大学, 医学(系)研究科(研究院), 助教 (10420514)
• 研究期間 (年度): 2013-04-01 – 2016-03-31
• キーワード: がん幹細胞

研究実績の概要

本研究は、予後不良な肝細胞癌を対象として、癌幹細胞 (CSC) を解析することで、肝内転移による再発の抑制に結びつける。近年、上皮間葉系移行 (EMT) や癌幹細胞 (CSC) が転移・再発に重要と考えられている。また、CSC は抗癌剤・放射線治療に対する抵抗性を有しており、癌の根治のためにはCSC を標的にした治療法が求められている。本研究では、高い転移・浸潤能を有する低分化型由来の細胞株から独自に誘導したCSC 表現型を示す浮遊細胞塊 (Sphere) を解析した。
前年度までに、2種類の低分化型HCC由来細胞株 (SK-HEP-1及びHLE) からSphere細胞を誘導し、これらSphere細胞がCSCの特徴であるstemnessマーカーの亢進、抗癌剤耐性能の亢進を示すとともに、肝転移能の亢進も示すことを明らかとした。また、Sphere細胞と親株との比較をmRNA, microRNA, proteinに関する網羅的解析を用いて行い、Sphere細胞に特徴的な発現プロファイルを得た。
続く平成26年度では、上述のSphere細胞における発現プロファイルを臨床サンプルにおける発現プロファイルと統合して解析を進めた。その結果、Sphere細胞にて発現が亢進し、臨床サンプルにおいても術後2年以上無再発群と比較して術後1年以内の早期再発群にて発現が亢進した遺伝子を4つ同定し、これらの知見について、HCCの再発予測マーカーおよび転移抑制の治療標的として特許出願を完了した。また、Sphere細胞において特異的な発現を示すmicroRNAについて、そのmimic及びinhibitor RNAを用いた解析から、Sphere特異的microRNAがCSCマーカーのひとつであるALDH1A発現を制御している可能性が示唆された。

現在までの達成度 (区分)

2: おおむね順調に進展している

理由

現在までに、治療標的となり得る分子の候補を複数得ることに成功し、成果の一部を論文化し特許出願に至っており、順調に進展しているといえる。

今後の研究の推進方策

得られた候補について、再発予測マーカーとしての精度の検証を進める。また、治療標的として適切であるかについて、パラフィン包埋ブロックにて保存している手術摘出標本を用いて免疫染色実験を行い、癌及び正常組織での発現を確認していくとともに、候補分子のHCCにおける機能解析を進める。

次年度使用額が生じた理由

平成27年度にて使用する試薬費とまとめて使用することが、効果的であると判断したため。

次年度使用額の使用計画

平成27年度の癌幹細胞誘導培地関連試薬と併せて使用する。

研究成果

• [雑誌論文] Preoperative serum methylation signature as prognostic tool after curative hepatectomy in patients with hepatocellular carcinoma (2015)
  • 著者名/発表者名: Shinsuke Kanekiyo, Norio Iizuka, Ryouichi Tsunedomi, Yukio Tokumitsu, Noriaki Hashimoto, Yoshihiro Tokuhisa, Yoshinari Maeda, Michihisa Iida, Kazuhiko Sakamoto, Takao Tamesa, Yusuke Fujita, Shigefumi Yoshino, Shoichi Hazama, Yoshihiko Hamamoto, and Masaaki Oka
  • 雑誌名: Anticancer Res 巻: 35 ページ: 997-1007
  • 査読あり
• [雑誌論文] A phase ΙI study of five peptides combination with oxaliplatin-based chemotherapy as a first-line therapy for advanced colorectal cancer (FXV study) (2014)
  • 著者名/発表者名: Shoichi Hazama, Yusuke Nakamura, Hiroaki Tanaka, Kosei Hirakawa, Ko Tahara, Ryoichi Shimizu, Hiroaki Ozasa, Ryuichi Etoh, Fumiaki Sugiura, Kiyotaka Okuno, Takumi Furuya, Taku Nishimura, Koichiro Sakata, Kazuhiko Yoshimatsu, Hiroko Takenouchi, Ryouichi Tsunedomi, Yuka Inoue, Shinsuke Kanekiyo, Yoshitaro Shindo, et al.
  • 雑誌名: Journal of Translational Medicine 巻: 12 ページ: 108
  • DOI: 10.1186/1479-5876-12-108
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Predictive Biomarkers for the Outcome of Vaccination of Five Therapeutic Epitope Peptides for Colorectal Cancer (2014)
  • 著者名/発表者名: Shoichi Hazama, Hiroko Takenouchi, Ryouichi Tsunedomi, Michihisa Iida, Nobuaki Suzuki, Norio Iizuka, Yuka Inoue, Kazuhiko Sakamoto, Mitsuhiro Nakao, Yoshitaro Shindo, Shinsuke Kanekiyo, Yukio Tokumitsu, Kiyoshi Yoshimura, Noriko Maeda, Kazunari Maeda, Yoshinari Maeda, Hiroto Matsui, Shigefumi Yoshino, et al.
  • 雑誌名: Anticancer Research 巻: 34 ページ: 4201-4205
  • 査読あり
• [雑誌論文] Cancer stem-like sphere cells induced from de-differentiated hepatocellular carcinoma-derived cell lines possess the resistance to anti-cancer drugs (2014)
  • 著者名/発表者名: Noriaki Hashimoto, Ryouichi Tsunedomi, Kiyoshi Yoshimura, Yusaku Watanabe, Shoichi Hazama, and Masaaki Oka
  • 雑誌名: BMC Cancer 巻: 14 ページ: 722
  • DOI: 10.1186/1471-2407-14-722
  • 査読あり / オープンアクセス / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] A stem cell medium containing neural stimulating factor induces a pancreatic cancer stem-like cell-enriched population (2014)
  • 著者名/発表者名: Yusaku Watanabe, Kiyoshi Yoshimura, Koichi Yoshikawa, Ryoichi Tsunedomi, Yoshitaro Shindo, Sou Matsukuma, Noriko Maeda, Shinsuke Kanekiyo, Nobuaki Suzuki, Atsuo Kuramasu, Kouhei Sonoda, Koji Tamada, Sei Kobayashi, Hideyuki Saya, Shoichi Hazama, and Masaaki Oka
  • 雑誌名: International Journal of Oncology 巻: 45 ページ: 1857-1866
  • DOI: 10.3892/ijo.2014.2603
  • 査読あり / オープンアクセス
• [学会発表] 肝細胞癌細胞株より誘導した癌幹細胞様細胞における肝転移能 (2014)
  • 著者名/発表者名: 恒富 亮一、硲 彰一、岡 正朗
  • 学会等名: 第25回日本消化器癌発生学会総会
  • 発表場所: ホテル日航福岡 (福岡県)
  • 年月日: 2014-11-13 – 2014-11-13
• [学会発表] 低分型ヒト肝細胞癌細胞株から誘導培養した癌幹細胞様細胞の解析 (2014)
  • 著者名/発表者名: 恒富 亮一、吉村 清、橋本 憲輝、渡邊 裕策、松隈 聰、岡 正朗
  • 学会等名: 第22回日本消化器関連学会週間 (JDDW2014)
  • 発表場所: 神戸国際展示場 (兵庫県)
  • 年月日: 2014-10-26 – 2014-10-26
• [学会発表] CANCER STEM-LIKE SPHERE CELLS INDUCED FROM DE-DIFFERENTIATED HEPATOCELLULAR CARCINOMA-DERIVED CELL LINES EXERTS LIVER METASTATIC POTENTIAL AND CHEMORESISTANCE (2014)
  • 著者名/発表者名: Ryouichi Tsunedomi, Kiyoshi Yoshimura, Noriaki Hashimoto, Yusaku Watanabe, Shoichi Hazama, and Masaaki Oka
  • 学会等名: 22nd United European Gastroenterology Week (UEGW2014)
  • 発表場所: ACV, Vienna, AUSTRIA
  • 年月日: 2014-10-22 – 2014-10-22
• [学会発表] Induced cancer stem-like sphere cells from de-differentiated human hepatocellular carcinoma cell lines (2014)
  • 著者名/発表者名: Ryouichi Tsunedomi, Kiyoshi Yoshimura, Shoichi Hazama, and Masaaki Oka
  • 学会等名: 第73回日本癌学会学術総会
  • 発表場所: パシフィコ横浜 (神奈川県)
  • 年月日: 2014-09-25 – 2014-09-25
• [学会発表] Biomarkers for immunotherapy: Results from the analysis of a HLA-A-status double-blind, biologically-randomized phase II study of five therapeutic epitope-peptides with oxaliplatin-based chemotherapy as first-line therapy for advanced colorectal cancer (FXV study) (2014)
  • 著者名/発表者名: Shoichi Hazama, Yusuke Nakamura, Hiroaki Tanaka, Fumiaki Sugiura, Kiyotaka Okuno, Kazuhiko Yoshimatsu, Hiroko Takenouchi, Ryouichi Tsunedomi, Yuka Inoue, Shinsuke Kanekiyo, Yoshitaro Shindo, Kiyoshi Yoshimura, Shigefumi Yoshino, Tomonobu Fujita, Yutaka Kawakami, and Masaaki Oka
  • 学会等名: 第18回日本がん免疫学会総会
  • 発表場所: ひめぎんホール (愛媛県)
  • 年月日: 2014-07-31 – 2014-07-31
• [学会発表] 抗癌剤耐性を示すヒト肝細胞癌細胞株から誘導した癌幹細胞様細胞 (2014)
  • 著者名/発表者名: 恒富亮一、吉村 清、橋本憲輝、渡邊裕策、岡 正朗
  • 学会等名: 第69回消化器外科学会総会
  • 発表場所: 郡山総合体育館 (福島県)
  • 年月日: 2014-07-17 – 2014-07-17
• [学会発表] ヒト肝細胞癌細胞株から誘導した癌幹細胞様細胞の解析 (2014)
  • 著者名/発表者名: 恒富亮一、吉村 清、橋本憲輝、渡邊裕策、松隈 聰、岡 正朗
  • 学会等名: 第23回癌病態治療研究会
  • 発表場所: ホテルグランヴェール岐山 (岐阜県)
  • 年月日: 2014-06-12 – 2014-06-12
• [学会発表] 肝細胞癌切除後予後予測マーカーとしてのMinichromosome maintenance complex component 6発現の意義 (2014)
  • 著者名/発表者名: 飯田道久、飯塚徳男、橋本憲輝、徳光幸生、恒富亮一、前田祥成、徳久善久、坂本和彦、為差卓夫、岡 正朗
  • 学会等名: 第114回日本外科学会定期学術集会
  • 発表場所: 国立京都国際会館 (京都府)
  • 年月日: 2014-04-04 – 2014-04-04
• [産業財産権] 肝細胞がんの転移性再発リスクの予測方法 (2015)
  • 発明者名: 岡 正朗、硲 彰一、恒富 亮一
  • 権利者名: 山口大学
  • 産業財産権種類: 特許
  • 産業財産権番号: 特願2015-016586
  • 出願年月日: 2015-01-30