| 研究課題/領域番号 |
25861263
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| 研究種目 |
若手研究(B)
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| 研究機関 | 金沢大学 |
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研究代表者 |
田中 慎吾 金沢大学, 大学病院, 医員 (40507084)
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| 研究期間 (年度) |
2013-04-01 – 2015-03-31
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| キーワード | Notchシグナル / 膠芽腫幹細胞 / MRK-003 |
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| 研究概要 |
提供していただいた膠芽腫患者から採取した9種類の膠芽腫幹細胞株を使用した。それぞれの膠芽腫幹細胞からのNotch受容体発現を定量的RT-PCRによる確認をした。細胞株をMRK-003（以下MRK)で処理しMTT assayにより細胞増殖能評価、Annexin Vを用いたフローサイトメトリーによりアポトーシス細胞の検出、sphere forming assayにより幹細胞形質評価を行った。また、膠芽腫の主軸シグナルかつNotchシグナル下流ともされるAktシグナルに着目し、MRK処理によるリン酸化型Aktレベルの変化をWestern blotで検証した。
結果は、RNAを抽出しすべての膠芽腫幹細胞株で種々のレベルで膠芽腫にかかわるとされるNotch1、Notch2の発現を認めた。MTT assayから算出した9種類の膠芽腫幹細胞株に対するMRK のIC50は、2μM以下の比較的感受性群 (n=5)、3μMから10μMの比較的低感受性群 (n=4) に分けられた。すべての細胞株でMRK濃度依存性にアポトーシス細胞が増加した。比較的感受性群はMRK＜3μM でSphereがほぼ消失し、比較的低感受性群はMRK＞8μMでSphere個数の高度低下が認められた。MRK処理後のリン酸化型Aktレベルは比較的感受性群で高度に低下し、比較的低感受性群ではほぼ不変であった。
以上の結果からMRKによる膠芽腫幹細胞の細胞増殖抑制、アポトーシス促進、幹細胞形質の喪失効果が観察された。また膠芽腫幹細胞株はMRKに対するリン酸化型Aktレベルの低下を指標として高感受性群と低感受性群に分けられると考えられた。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
計画していた全ての細胞ラインにおいてRT-PCRによるNotch受容体の発現、MRK-003に対する細胞増殖アッセイ、アポトーシスアッセイ、Sphere-formationアッセイ、MRK-003によるAktシグナルの変化を実施することができた。また再現性も確認しているため、おおむね予定通り進行している。
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| 今後の研究の推進方策 |
MRK-003処理によるリン酸化Aktの発現レベル低下によりMRK-003の薬剤感受性が異なることが示唆されたため、比較的感受性細胞株にAktの過剰発現させてMRK-003の効果がどのように変化するかを評価する実験も加える。
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