グリオーマの悪性転化に関わる新規バイオマーカーの機能解明

2013 年度 実施状況報告書

• 研究課題/領域番号: 25861268
• 研究種目: 若手研究(B)
• 研究機関: 名古屋大学
• 研究代表者: 本村 和也 名古屋大学, 医学部附属病院, 助教 (30467295)
• 研究期間 (年度): 2013-04-01 – 2015-03-31
• キーワード: グリオーマ / 悪性転化 / DMBT1 / MET

研究概要

我々は、一次性及び二次性膠芽腫に共通して高頻度に見られる第10番染色体長腕欠失及び、第7番染色体長腕増幅という遺伝子異常に着目し、ある共通の遺伝子異常が低悪性度グリオーマから二次性膠芽腫への悪性転化の原因になっているのではないかと考えている。以前、低悪性度グリオーマにおける網羅的遺伝子解析により、DMBT1などの新規がん抑制遺伝子およびMETなどの新規がん遺伝子を見出した。DMBT1欠失及びMET増幅のあるグリオーマ幹細胞株に、DMBT1及びMET-shRNAを遺伝子導入し、様々な機能解析をすることで、悪性グリオーマの腫瘍増殖・進展及び悪性転化に関わるメカニズムを解明することを目的として研究を進めている。
本年度は、DMBT1及びMET-shRNAを発現するベクターを作成し、遺伝子組み込みを主に行ってきた。まず本年度前半は、DMBT1の遺伝子導入及びMET遺伝子をノックダウンするために、高効率遺伝子導入用レトロウイルスベクターであるpDON-AI-2 DNAを使用して、DMBT1及びMET-shRNAを発現するベクター作成を行ってきた。かなりの時間を要したがベクター作成に成功することができた。
次に、我々が持つ4種類のグリオーマ幹細胞株（Glioma-initiating cells; GICs）とグリオーマ細胞株(T98G, U251, U87)に遺伝子導入を試みているが、なかなか導入が困難であり時間を要している。特に、GICへの遺伝子導入が不安定であり、条件を変えながら行っているが未だ作成できずに終わっている。現在は、GIC以外で、U87のグリオーマ細胞株を中心に安定発現細胞株の作成を目標としているが、試行錯誤している段階にある。

現在までの達成度 (区分)

3: やや遅れている

理由

DMBT1及びMET-shRNAを発現するベクター作成にかなりの時間を要したことと、4種類のグリオーマ幹細胞株とグリオーマ細胞株(T98G, U251, U87)に遺伝子導入を試みているが、なかなか導入が困難であり時間を要しているため。

今後の研究の推進方策

グリオーマ幹細胞株とグリオーマ細胞株(T98G, U251, U87)に遺伝子導入を成功させ、DMBT1遺伝子導入細胞株及びMET遺伝子のノックダウン細胞株の形態変化、腫瘍の増殖進展様式を詳細に観察することを目標としている。

次年度の研究費の使用計画

購入予定していたベクターの購入数が少なくてすんだため、次年度使用額が生じた。
In vivo実験でのマウス購入にあてたいと考えている。

研究成果

• [雑誌論文] Peptide-based inhibition of the HOXA9/PBX interaction retards the growth of human meningioma (2014)
  • 著者名/発表者名: Ando H, Natsume A, Senga T, Watanabe R, Ito I, Ohno M, Iwami K, Ohka F, Motomura K, Kinjo S, Ito M, Saito K, Morgan R, Wakabayashi T
  • 雑誌名: Cancer Chemother Pharmacol. 巻: 73(1) ページ: 53-60
  • DOI: 10.1007/s00280-013-2316-5.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Preclinical evaluation of an O6-methylguanine-DNA methyltransferase -siRNA/liposome complex administered by convection-enhanced delivery to rat and porcine brains (2014)
  • 著者名/発表者名: Tsujiuchi T, Natsume A, Motomura K, Kondo G, Melissa Ranjit, Hachisu R, Sugimura I, Tomita S, Takehara I, Max Woolley, Neil Barua, Steven Gill, Alison Bienemann, Yamashita Y, Toyokuni S, Wakabayashi T
  • 雑誌名: American Journal of Translational Research 巻: 6(2) ページ: 169-178
  • 査読あり
• [雑誌論文] Quantitative metabolome analysis profiles activation of glutaminolysis in glioma with IDH1 mutation. (2014)
  • 著者名/発表者名: Ohka F, Ito M, Ranjit M, Senga T, Motomura A, Motomura K, Saito K, Kato K, Kato Y, Wakabayashi T, Soga T, Natsume A.
  • 雑誌名: Tumour Biol 巻: - ページ: in press
  • 査読あり
• [雑誌論文] Association of dorsal inferior frontooccipital fasciculus fibers in the deep parietal lobe with both reading and writing processes: a brain mapping study. (2014)
  • 著者名/発表者名: Motomura K, Fujii M, Maesawa S, Kuramitsu S, Natsume A, Wakabayashi T.
  • 雑誌名: J Neurosurg. 巻: - ページ: in press
  • 査読あり
• [雑誌論文] MET gain in diffuse astrocytomas is associated with poorer outcome. (2013)
  • 著者名/発表者名: Pierscianek D, Kim YH, Motomura K, Mittelbronn M, Paulus W, Brokinkel B, Keyvani K, Wrede K, Nakazato Y,Tanaka Y,Mariani L, Vital A, Sure U, Ohgaki H.
  • 雑誌名: Brain Pathology 巻: 23(1) ページ: 13-18
  • DOI: 10.1111/j.1750-3639.2012.00609.x.
  • 査読あり
• [雑誌論文] PDGFRA Gain in Low-Grade Diffuse Gliomas (2013)
  • 著者名/発表者名: Motomura K, Mittelbronn M, Paulus W, Brokinkel B, Keyvani K, Sure U, Wrede K, Nakazato Y,Tanaka Y, Nonoguchi N, Pierscianek D, Kim YH, Mariani L, Vital A, Perry A, Ohgaki H
  • 雑誌名: J Neuropathol Exp Neurol. 巻: 72(1) ページ: 61-66
  • DOI: 10.1097/NEN.0b013e31827c4b5b
  • 査読あり
• [雑誌論文] Lack of presence of the human cytomegalovirus in human glioblastoma (2013)
  • 著者名/発表者名: Yamashita Y, Ito Y, Isomura H, Takemura N, Okamoto A, Motomura K, Tsujiuchi T, Natsume A, Wakabayashi T, Toyokuni S, Tsurumi T
  • 雑誌名: Modern Pathology 巻: epub ページ: 1-8
  • DOI: 10.1038/modpathol.2013.219
  • 査読あり
• [学会発表] Intra-tumoral heterogeneity of PDGFRA / MET gain in WHO grade II diffuse astrocytomas (2013)
  • 著者名/発表者名: Motomura K, Mittelbronn M, Paulus W, Brokinkel B, Keyvani K, Sure U, Wrede K, Nakazato Y,Tanaka Y, Nonoguchi N, Pierscianek D, Kim YH, Mariani L, Vital A, Perry A, Ohgaki H
  • 学会等名: AACR Annual Meeting 2013
  • 発表場所: Washington, DC, USA
  • 年月日: 20130406-20130410
• [学会発表] 脳腫瘍手術における術中運動神経モニタリング
  • 著者名/発表者名: 本村和也
  • 学会等名: 第3回奈良術中神経モニター講習会
  • 発表場所: AP大阪駅前梅田1丁目、大阪市
  • 招待講演
• [学会発表] WHO grade II diffuse astrocytomaに おけるPDGFRA / MET gainの腫瘍内不均一性
  • 著者名/発表者名: 本村和也、夏目敦至、若林俊彦、Hiroko Ohgaki
  • 学会等名: 第31回日本脳腫瘍病理学会
  • 発表場所: KFC Hall 国際ファッションセンター、東京都墨田区