| 今後の研究の推進方策 |
①血清、脳脊髄液、脳組織の生化学的解析：ELISAおよびHPLCにより、E2、コルチコステロン、セロトニン、TNFαやIL6などのサイトカインの濃度を測定する。
②海馬、視床下部のmRNA発現およびシグナル伝達解析：ERα, ERβ, GPR30, グルココルチコイド受容体、セロトニン受容体、BDNFなどの神経栄養因子、TNFαやIL6などのサイトカインのmRNA発現をリアルタイムPCRにて検証する。またエストロゲンおよびBDNFシグナル蛋白のリン酸化(PKA, CREBなど)はWestern blotにて検証する。
③E2経鼻投与の条件設定：E2経鼻投与後、末梢静脈血と中枢CSFでのE2濃度をそれぞれ測定し、中枢選択性の高い至適投与プロトコールを決定する。
④E2経鼻投与の糖脂質代謝・うつ改善効果についての検討：代謝表現系の解析として、(1)体重測定、(2)糖負荷試験、インスリン負荷試験、 (3)血液生化学検査（E2、アディポカイン、脂質、インスリンなどの測定）、(4)代謝ケージによる測定（エネルギー消費量、自発運動量、摂食量）、(5) 小動物用MRIによる脂肪体積測定（内臓脂肪・皮下脂肪）、各組織重量の測定、(6) 深部体温の測定、を行う。また改善の機序解明のため、肝臓の糖新生律速酵素（G6Pase, PEPCK）発現、脂肪組織で脂肪合成に関わる酵素（LPL, FAS）や脂肪分解に関わる酵素（HSL）、脂肪組織の慢性炎症に関連するTNFα、IL-6などのサイトカイン、MCP-1などのケモカイン、M1マクロファージの指標となるCD11cの発現、褐色脂肪組織の熱産生に関わるUCP1-3のmRNA発現をリアルタイムPCRにて解析する。
⑤うつ・不安の行動実験および生化学的解析：うつ、不安の行動実験を行い、血清および海馬、視床下部、大脳皮質に対する生化学的検討を①、②と同様に行う。
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