日本人網膜色素変性患者におけるEYS遺伝子変異の迅速検査法の開発と臨床への応用

2014 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 25861626
• 研究機関: 浜松医科大学
• 研究代表者: 細野 克博 浜松医科大学, 医学部, 助教 (60402260)
• 研究期間 (年度): 2013-04-01 – 2015-03-31
• キーワード: 網膜色素変性 / EYS遺伝子

研究実績の概要

網膜色素変性(RP)は、失明に至る進行性、遺伝性の疾患群で、眼科領域で最も重篤な疾患である。本疾患に対して有効な治療法が開発されるためには遺伝子レベルでの病因解明が必要である。申請者らは、我が国の常染色体劣性(ar)RP患者でEYSに変異が検出される頻度が非常に高いことを報告した(Hosono et al., PLoS ONE 2012)。
日本人arRP患者の遺伝子診断にはEYSの変異解析が重要である。しかし、EYSはエキソン数が多く翻訳領域も長いためゲノムDNAを用いた変異解析法は効率が悪い。申請者はEYSのmRNAが鼻腔粘細胞に発現していることを発見した。本研究は鼻粘膜から擦過した検体を用いて簡易で精密なEYSの変異解析法を開発し、日本人RP患者の遺伝子診断に応用するための基礎データを収集することが目的である。またEYSに変異が同定されている患者の中で片側アリルの変異のみしか同定されていない患者が複数例見つかっている。変異が片側アレルにしか同定されなかった症例の原因の１つとして、変異が見つかっていない片側アリルの一部エキソン領域に欠失や重複が存在している可能性がある。その場合、PCRダイレクトシーケンス法では検出できないためにMLPA解析を併用する必要がある。
本年度は、正常人の鼻腔粘膜細胞からRNAを抽出し、RT-PCR法を用いて鼻腔粘膜細胞に発現しているEYSの構造解析を行った。結果、鼻腔粘膜細胞由来cDNAからは、網膜で発現しているEYSのエキソン33の一部とエキソン34~44の転写物を確認した。また、片側アリルの変異のみしか原因変異を同定されていない9名の患者にEYSについてMLPA解析を行い、2名にコピー数異常が示唆された。EYSの変異解析にエキソンレベルのコピー数変異の検討は重要である。

研究成果

• [雑誌論文] The first USH2A mutation analysis of Japanese autosomal recessive retinitis pigmentosa patients: a totally different mutation profile with the lack of frequent mutations found in Caucasian patients. (2014)
  • 著者名/発表者名: Yang Zhao, Katsuhiro Hosono, Kimiko Suto, Chie Ishigami, Yuki Arai, Akiko Hikoya, Yasuhiko Hirami, Masafumi Ohtsubo, Shinji Ueno, Hiroko Terasaki, Miho Sato, Hiroshi Nakanishi, Shiori Endo, Kunihiro Mizuta, Hiroyuki Mineta, Mineo Kondo, Masayo Takahashi, Shinsei Minoshima, Yoshihiro Hotta.
  • 雑誌名: J Hum Genet. 巻: 59 ページ: 521-528
  • DOI: doi:10.1038/jhg.2014.65.
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [学会発表] The first USH2A mutation analysis of Japanese Autosomal Recessive Retinitis Pigmentosa patients: A totally different mutation profile with the lack of frequent mutations found in Caucasian patients (2014)
  • 著者名/発表者名: Katsuhiro Hosono, Yang Zhao, Kimiko Suto, Chie Ishigami, Yuuki Arai, Akiko Hikoya, Yasuhiko Hirami, Masafumi Ohtsubo, Shinji Ueno, Hiroko Terasaki, Miho Sato, Hiroshi Nakanishi, Shiori Endo, Kunihiro Mizuta, Hiroyuki Mineta, Mineo Kondo, Masayo Takahashi, Shinsei Minoshima, and Yoshihiro Hotta
  • 学会等名: XVIth International Symposium on Retinal Degeneration
  • 発表場所: California
  • 年月日: 2014-07-13 – 2014-07-18
• [学会発表] Mutation Analysis of the USH2A Gene in Japanese Patients with Autosomal Recessive Retinitis Pigmentosa (2014)
  • 著者名/発表者名: Katsuhiro Hosono, Yang Zhao, Chie Ishigami, Shinji Ueno, Hiroshi Nakanishi, Hiroko Terasaki, Mineo Kondo, Masayo Takahashi, Shinsei Minoshima, and Yoshihiro Hotta
  • 学会等名: ARVO2014
  • 発表場所: Orland
  • 年月日: 2014-05-04 – 2014-05-08
• [学会発表] Molecular Genetics of Retinitis Pigmentosa in East Asian Populations (2014)
  • 著者名/発表者名: Katsuhiro Hosono
  • 学会等名: WOC2014
  • 発表場所: Tokyo
  • 年月日: 2014-04-02 – 2014-04-06
  • 招待講演
• [学会発表] 常染色体劣性網膜色素変性の日本人患者におけるUSH2A遺伝子の変異解析 (2014)
  • 著者名/発表者名: 細野克博、石上智愛、須藤希実子、荒井優気、趙洋、水田邦博、峯田周幸、上野真治、寺﨑浩子、近藤峰生、高橋政代、蓑島伸生、堀田喜裕
  • 学会等名: 第118回日本眼科学会総会
  • 発表場所: 東京
  • 年月日: 2014-04-02 – 2014-04-06
• [図書] 眼科 眼と遺伝 2.網膜色素変性 (2014)
  • 著者名/発表者名: 細野克博、堀田喜裕
  • 総ページ数: 112（569-574）
  • 出版者: 金原出版
• [図書] RETINA Medicine ゲノムと網膜関連疾患の関与を探る 網膜色素変性 (2014)
  • 著者名/発表者名: 堀田喜裕、細野克博
  • 総ページ数: 94（26-32）
  • 出版者: 先端医学社