| 研究概要 |
ジルコニア結合能と抗菌活性を有する人工タンパク質、およびジルコニア円板の作製
1) 機能性人工タンパク質のデザイン：機能性人工タンパク質には、申請者が同定したジルコニア結合ペプチドモチーフ、および抗菌ペプチドモチーフを用いる。抗菌ペプチドモチーフには、ヒト唾液中に含まれるhistatin5の配列を用いる。histatin5 はCandida albicans やP. gingivalis に抗菌活性を示す(Kato et al., Eur J Med Res, 29:528–532, 2004)ことが報告されている。デザインした機能性人工タンパク質のアミノ酸配列を以下に示す。
①WYSSMSEDKRGW：ジルコニア結合ペプチド、②DSHAKRHHGYKRKFHEKHHSHRGY：histatin 5、③WYSSMSEDKRGWDSHAKRHHGYKRKFHEKHHSHRGY：ジルコニア結合ペプチド/histatin 5融合人工タンパク質
2) 機能性人工タンパク質の作製：上記3種のペプチドおよび人工タンパク質はFmoc (9-fluorenylmethyloxycarbonyl) method (Carpino and Han, J Am Chem Soc, 92:5748–5749,1970)にて合成し、高速液体クロマトグラフィ(high performance liquid chromatography; HPLC)にて>95%に精製することで作製した。
3)ジルコニア円板の作製：1)、2)で作製した機能性人工タンパク質のジルコニア結合能および抗菌活性の評価で使用するジルコニア円板を、Hashimoto et al.の方法(Hashimoto K et a., Dent Mater J. 30:935-40, 2011)に従って作製した。
|
| 今後の研究の推進方策 |
ジルコニア結合能と抗菌活性を有する人工タンパク質のin vitro 評価
1) ジルコニア結合能の評価
作製した機能性人工タンパク質のジルコニアへの結合能および吸着量は、先行論文(Yoshinari et al., Biofouling, 26: 103-110, 2010 )に従ってQCM(Quartz Crystal Microbalance; 水晶発振子微量天秤)およびジルコニアセンサーを用いてセンサー表面へのタンパク質の吸着量をモニタリングし、さらに抗histatin5 抗体を用いた免疫蛍光染色にてジルコニア円板表面に固層化された機能性人工タンパク質を観察することで検討・証明する。
2) 抗菌活性の評価
抗菌活性に関しては、機能性人工タンパク質をコーティングしたジルコニア円板上でP. gingivalis を37℃、嫌気条件下で2 日間培養し、生菌のATP 活性を吸光度測定器で検出することで生菌数を概算して検討する。
|
