| 研究実績の概要 |
TGF-beta/ Smadシグナルが口腔扁平上皮癌頸部リンパ節転移に及ぼす影響について解明するために口腔扁平上皮癌頸部リンパ節高転移株であるSAS-LM8とその親株SAS-GFPを使用して実験を行った.EMTを強力に誘導するTGF-betaは発癌初期では強力な細胞増殖抑制作用によって癌抑制的に働くが, 癌の進展とともに後期では癌促進的に働き, 癌の浸潤・転移に関与することが知られている. これまでにSAS-LM8とSAS-GFPにTGF-beta刺激を行うと, 両細胞の細胞形態や細胞間接着, 細胞増殖能に変化は認めなかったが, 両細胞の遊走能が亢進した. さらにEMT関連マーカーのRT-PCRでは両細胞ともにTGF-beta刺激によりSlug, Snail, Twistの発現に大きな変化はなく, E-cadherinの発現にも大きな変化は認めなかった. N-cadherin, Vimentinの発現はTGF-beta刺激により両細胞ともに増強傾向を示し, 間葉移行の傾向を認めた. また両細胞ともにTGF-beta刺激よってbeta-cateninの局在は変化しなかった. TGF-beta刺激によって, 両細胞ともにWnt5aの発現に変化はなかったが, Wnt5bの発現の亢進が認められた. アクチン細胞骨格の観察では両細胞ともにTGF-beta刺激によって細胞周囲に仮足様突起の伸展が認められた.
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| 今後の研究の推進方策 |
TGF-beta刺激によるSAS-LM8とSAS-GFPの変化がSmad経路を介するのか, non-Smad経路を介するのかを検討するために, Smadのリン酸化をimmunoblottingで確認するほか, リン酸化Smad2/3やSmad4が核に局在するかを蛍光免疫染色で観察する. Smadのリン酸化が認められない場合は, non-Smad経路を介してのシグナル伝達が予想されるので, MAPK, PI3K/Akt, small GTPaseの活性を確認する.
またTGF-beta刺激による両細胞の細胞運動能の亢進がどの遺伝子を介するのかを解析するために細胞運動能に関連する遺伝子のreal time PCR arrayを行う.
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