| 研究課題/領域番号 |
25861990
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| 研究種目 |
若手研究(B)
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| 研究機関 | 地方独立行政法人神奈川県立病院機構神奈川県立がんセンター(臨床研究所) |
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研究代表者 |
野口 映 地方独立行政法人神奈川県立病院機構神奈川県立がんセンター(臨床研究所), その他部局等, その他 (10456395)
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| 研究期間 (年度) |
2013-04-01 – 2016-03-31
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| キーワード | SIRT1 / エピジェネティクス / 扁平上皮癌 / HDAC / 口腔癌 |
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| 研究概要 |
１）神奈川県立がんセンターにて治療された437症例の検体を用い、SIRT1発現を免疫組織学的に評価した。その結果、SIRT1の発現は79.6%の症例においてみられ、リンパ節転移とステージに負の相関を示し、予後良好因子 (p=0.011) であるということを明らかにした。部位別に、舌およびそのほか口腔に限定した場合においても、同様の傾向を示し、COX比例ハザードモデルを使用した多変量解析を行い、その発現が独立した予後規定因子であることを証明した。
２）内在性にSIRT1の発現が高い細胞（B-88）に対し、RNA干渉法を用いたSIRT1の発現抑制を行った。また、内在性にSIRT1の発現が低い細胞（HSC-2およびHSC-4）へは、リポフェクション法により、SIRT1の発現ベクターを導入し、強制発現を行った。今後は、これらの細胞における細胞増殖能、細胞遊走能、細胞周期、浸潤能をそれぞれMTTアッセイ法、フローサイトメトリー、wound healingアッセイ法、トランスウェルアッセイ法を行い、比較検討する予定となっている。
３）in vivoでの実験系を行うにあたり、一過性の遺伝子発現では長期間に渡る検討に適していない。そのため、通法に従い、SIRT1の発現ベクターを導入したのち、薬剤選択マーカーG418を使用し、クローニングを行い、定常発現株を樹立する。現在、TET-ON 3Gシステムを用いた細胞株を樹立を行っている。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
SIRT1安定発現細胞株の作製において、通法通りの実験系では樹立することができなかった。そのため、テトラサイクリン依存性のシステムを用い、実験の継続を行っている。
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| 今後の研究の推進方策 |
当初予定された計画に基づき、実験の遂行を行う。
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| 次年度の研究費の使用計画 |
当初予定した実験が計画変更により、本年度の予定となったため。
順次、予定した試薬を購入予定である。
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