センシング用生体分子のナノレベル整列化技術の開発

2015 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 25870310
• 研究機関: 大阪大学
• 研究代表者: 飯嶋 益巳 大阪大学, 産業科学研究所, 特任助教 (40390728)
• 研究期間 (年度): 2013-04-01 – 2016-03-31
• キーワード: バイオナノカプセル / バイオセンサー / バイオセンシング / 分子整列化 / ナノバイオ

研究実績の概要

研究代表者は現在までに、IgG-Fc領域を特異的に表面に固定化出来るバイオナノカプセル (ZZ-BNC)を開発し、抗体分子のクラスター化と整列化、更に固相上に整列化された抗体を検出する能力を有することを見出し、各種イムノアッセイやイムノセンサーを高機能化すると共に、抗体分子の整列化度合いを評価するプローブを開発した。そこで本研究は、同技術を抗体以外のセンシング分子にも応用し、バイオセンサー全般の飛躍的な機能向上を目的とした。
最終年度は、H26年度に見出した水晶発振子微量天秤（QCM）センサーを用いたZZ-BNCによるレセプター-リガンド相互作用の高感度化技術の汎用性を高めるために、表面プラズモン共鳴（SPR）センサー、酵素標識リガンド結合アッセイへ展開し、両手法の検出感度及びリガンド結合能が著しく上昇することを見出した。さらに、ZZ-BNCの平面膜化を検討し、より広範なバイオセンサーの高感度化、高機能化を図っている。なお、これらの成果は、原著論文、学会、ホームページ等で発表し、社会・国民に向けて積極的に情報発信を行った。
本研究期間全体を通じて、まず、Protein GおよびProtein L由来の各IgG結合ドメインをもつBNC(LG-BNC, LL-BNC)を作製し、ZZ-BNCでは結合力が弱いあるいは結合しない抗体と結合能を有することを見出し、優位性を示した。さらに、抗体以外のセンシング分子（Fc融合レセプター）に応用展開し、QCM、SPR、酵素標識リガンド結合アッセイのリガンド-レセプター相互作用の検出感度を飛躍的に向上することに成功した。本研究期間に得られた成果は、原著論文、特許申請、学会、ホームページ等での発表を行い、社会・国民に向けて積極的に情報発信を行ったことから、本研究の意義、重要性は非常に高いと考えられる。

研究成果

• [雑誌論文] Bio-nanocapsule-based scaffold improves the sensitivity and ligand-binding capacity of mammalian receptors on the sensor chip (2016)
  • 著者名/発表者名: Iijima, M., Yoshimoto, N., Niimi, T., Maturana, A.D., Kuroda, S.
  • 雑誌名: Biotechnology journal 巻: 印刷中 ページ: 印刷中
  • DOI: 10.1002/biot.201500443
  • 査読あり / 国際共著 / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Mutational analysis of hepatitis B virus pre-S1 (9-24) fusogenic peptide (2016)
  • 著者名/発表者名: Liu, Q., Somiya, M., Shimada, N., Sakamoto, W, Yoshimoto, N., Iijima, M., Tatematsu, K., Nakai, T., Okajima, T., Maruyama, A., Kuroda, S.
  • 雑誌名: Biochemical and Biophysical Research Communications 巻: 印刷中 ページ: 印刷中
  • 査読あり / 国際共著 / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Scaffold protein Enigma Homolog 1 overcomes the repression of myogenesis activation by Inhibitor of DNA binding 2 (2016)
  • 著者名/発表者名: Nakatani, M., Ito, J., Koyama, R., Iijima, M., Yoshimoto, N., Niimi, T., Kuroda, S.
  • 雑誌名: Biochemical and Biophysical Research Communications 巻: 印刷中 ページ: 印刷中
  • 査読あり / 国際共著
• [雑誌論文] Bio-nanocapsules displaying various immunoglobulins as an active targeting-based drug delivery system. (2016)
  • 著者名/発表者名: Tatematsu, K., Iijima, M., Yoshimoto, N., Nakai, T., Okajima, T., Kuroda, S.
  • 雑誌名: Acta Biomaterialia 巻: 35 ページ: 238-247
  • DOI: 10.1016/j.actbio.2016.02.010
  • 査読あり / 国際共著 / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Cytokine-dependent activation of the JAK-STAT pathway in Saccharomyces cerevisiae (2016)
  • 著者名/発表者名: Yoshimoto, N., Ikeda, Y., Tatematsu, K., Iijima, M., Nakai, T., Okajima, T., Tanizawa, K., Kuroda, S.
  • 雑誌名: Biotechnology and Bioengineering 巻: 印刷中 ページ: 印刷中
  • DOI: 10.1002/bit.25948
  • 査読あり / 国際共著
• [雑誌論文] Mapping the heparin-binding site of the osteoinductive protein NELL1 by site-directed mutagenesis (2015)
  • 著者名/発表者名: Takahashi, K., Imai, A., Iijima, M., Yoshimoto, N., Maturana, A.D., Kuroda, S., Niimi, T.
  • 雑誌名: FEBS Letters 巻: 589 (24 Pt B) ページ: 4026-4032
  • DOI: 10.1016/j.febslet.2015.11.032
  • 査読あり / 国際共著
• [雑誌論文] Scaffold protein Enigma Homolog activates CREB whereas a short splice variant prevents CREB activation in cardiomyocytes (2015)
  • 著者名/発表者名: Ito, J., Iijima, M., Yoshimoto, N., Niimi, T., Kuroda, S., Maturana, A.D.
  • 雑誌名: Cellular Signalling 巻: 27 ページ: 2425-2433
  • DOI: 10.1016/j.cellsig.2015.09.007
  • 査読あり / 国際共著
• [雑誌論文] Virosomes of hepatitis B virus envelope L proteins containing doxorubicin: synergistic enhancement of human liver-specific anti-tumor growth activity by radiotherapy (2015)
  • 著者名/発表者名: Liu, Q., Jung, J., Somiya, M., Iijima, M., Yoshimoto, N., Niimi, T., Maturana, A.D., Shin, S.H., Jeong, S.Y., Choi, E.K., Kuroda, S.
  • 雑誌名: International Journal of Nanomedicine 巻: 10 ページ: 4159-4172
  • DOI: 10.2147/IJN.S84295
  • 査読あり / 国際共著 / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Interacellular trafficking of bio-nanocapsule-liposome complex: identification of fusogenic activity in the pre-S1 region of hepatitis B virus surface antigen L protein (2015)
  • 著者名/発表者名: Somiya, M., Sasaki, Y., Matsuzaki, T., Iijima, M., Yoshimoto, N., Niimi, T., Maturana, A.D., Kuroda, S
  • 雑誌名: Journal of Controlled Release 巻: 212 ページ: 10-18
  • DOI: 10.1016/j.jconrel.2015.06.012
  • 査読あり / 国際共著 / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] One-step scalable preparation method for non-cationic liposomes with high siRNA content (2015)
  • 著者名/発表者名: Somiya, M., Yamaguchi, K., Liu, Q., Niimi, T., Maturana, A.D., Iijima, M., Yoshimoto, N., Kuroda, S.
  • 雑誌名: International Journal of Pharmaceutics 巻: 490 ページ: 316-323
  • DOI: 10.1016/j.ijpharm.2015.05.072
  • 査読あり / 国際共著 / 謝辞記載あり
• [学会発表] Reconstituted ZZ-L particles and planar ZZ-L membrane for the oriented immobilization of Fc-fused molecules on various types of biosensors (2016)
  • 著者名/発表者名: Iijima, M., Kuroda S.
  • 学会等名: Biosensors2016
  • 発表場所: Gothenburg, Sweden
  • 年月日: 2016-05-25 – 2016-05-27
  • 国際学会
• [学会発表] High efficiency penetration of antibody-immobilized nanoneedle thorough plasma membrane for in situ detection of cytoskeletal proteins in living cells (2016)
  • 著者名/発表者名: Shimizu, K., Kawamura, R., Iijima, M., Kuroda, S., Fukazawa, K., Ishihara, K., Nakamura, C.
  • 学会等名: Biosensors2016
  • 発表場所: Gothenburg, Sweden
  • 年月日: 2016-05-25 – 2016-05-27
  • 国際学会
• [学会発表] Detection of vimentin using antibody-modified nanoneedle and AFM to eliminate undifferentiated iPS cells (2015)
  • 著者名/発表者名: Shimizu, K., Kawamura, R., Kobayashi, T., Iijima, M., Kuroda, S., Iwata, F., Fukazawa, K., Ishihara, K., Nakamura, C.
  • 学会等名: Pacifichem2015
  • 発表場所: Honolulu, USA
  • 年月日: 2015-12-15 – 2015-12-20
  • 国際学会
• [学会発表] Bio-nanocapsule-based Scaffold for Biosensing Techniques: A Clustering and Oriented Immobilization of Sensing Molecules (2015)
  • 著者名/発表者名: Iijima, M., Kuroda S.
  • 学会等名: The 19th SANKEN International Symposium
  • 発表場所: Osaka, Japan
  • 年月日: 2015-12-07 – 2015-12-09
  • 国際学会
• [学会発表] バイオナノカプセル足場分子を用いたセンシング分子整列化技術の受容体リガンド検出への応用 (2015)
  • 著者名/発表者名: 飯嶋益巳、黒田 俊一
  • 学会等名: 第67回日本生物工学会大会
  • 発表場所: 鹿児島
  • 年月日: 2015-10-26 – 2015-10-28
• [学会発表] バイオナノカプセルを用いた抗炎症タンパク質MTI-IIの生体内ピンポイント送達法の開発 (2015)
  • 著者名/発表者名: 立松健司、岡本一起、飯嶋益巳、黒田 俊一
  • 学会等名: 第67回日本生物工学会大会
  • 発表場所: 鹿児島
  • 年月日: 2015-10-26 – 2015-10-28
• [学会発表] ビメンチンを標的とした未分化ヒトiPS細胞の機械的分離 (2015)
  • 著者名/発表者名: 清水桂太、川村隆三、小林 健、飯嶋益巳、黒田俊一、岩田 太、中村 史
  • 学会等名: 第67回日本生物工学会大会
  • 発表場所: 鹿児島
  • 年月日: 2015-10-26 – 2015-10-28
• [図書] DDSキャリア作製プロトコル集 (2015)
  • 著者名/発表者名: 飯嶋益巳、黒田俊一
  • 総ページ数: 262
  • 出版者: CMC出版
• [備考] 生体分子ナノレベル整列固定化技術の開発
  • URL: http://www.sanken.osaka-u.ac.jp/labs/smb/Biosensor.html
• [備考] １０倍超す高感度、低コスト効率よく…臨床検査法を実用化 阪大、免疫測定法に抗体「足場」分子
  • URL: http://www.sankei.com/west/news/160105/wst1601050051-n1.html