ＦＡＰの発症を規定する断片化ＴＴＲの形成機構の解明および新規病態マーカーの開発

2013 年度 実施状況報告書

• 研究課題/領域番号: 25870541
• 研究種目: 若手研究(B)
• 研究機関: 熊本大学
• 研究代表者: 植田 光晴 熊本大学, 医学部附属病院, 講師 (60452885)
• 研究期間 (年度): 2013-04-01 – 2015-03-31
• キーワード: アミロイドーシス / FAP / トランスサイレチン / 断片化 / トリプシン

研究概要

家族性アミロイドーシスポリニューロパチー（FAP）は、トランスサイレチン（TTR）遺伝子の変異により、末梢神経障害などでTTRがアミロイド線維化する代表的な遺伝性ニューロパチーである。しかし、同じ遺伝子変異でも患者の出身地により発症年齢や浸透率が大きく異なることが知られている。すなわち、集積地（熊本や長野）のFAP家系は発症年齢が20-30歳代と低く浸透率も高いが、非集積地のFAP家系では発症年齢が50-80歳代と高く、浸透率も低いため家族歴が明確でない場合が多い。本研究では、組織に沈着したアミロイドから検出される断片化TTRに着目し、集積地と非集積地のFAP家系でTTR断片化の出現に差があるかなど、本症の病態と断片化TTRが関与するか検証するとともに、TTR断片化の生じる機構をin vitroで解析した。非集積地FAP患者の組織からは断片化TTRが検出されたが、集積地FAP患者の組織からは断片化TTRが検出されない傾向が認められた。神経由来の細胞株にTTRアミロイドを加えた場合にTTRの断片化が生じた。TTRの断片化部位を解析したところ、トリプシンの切断部位と類似していた。siRNAを用いて、トリプシノーゲンの発現を抑制すると断片化TTRの生成も抑制された。また、試験管内で、トリプシンとTTRアミロイドを混合し、インキュベーションしたところ、細胞培養で観察されたものと類似したTTRの断片化が生じることが判明した。未変性のTTRとトリプシンをインキュベーションしても、TTRの断片化は検出されなかったことから、トリプシンによる断片化にはTTRのアミロイド化が必要であると考えられた。断片化TTRは本症の発症に関連していると考えられる。TTRの断片化はアミロイド線維形成後に生じ、トリプシンがTTR断片化に関与していると考えられる。

現在までの達成度 (区分)

2: おおむね順調に進展している

理由

トランスサイレチンの断片化機構をin vitroの検討を中心に明らかになってきた。研究は当初の計画通りに進行している。

今後の研究の推進方策

リコンビナント断片化TTR、断片化TTRに対する抗体を作成し、さらに詳細に解析を進める。また、臨床検体を用いた検討を行うことや、断片化TTRを用いた病態モデルを作成し、新規の治療法や診断法の開発を検討する。

次年度の研究費の使用計画

作成中であるリコンビナント断片化TTRに対する抗体の作成が本年度中に完了しなかったため、次年度に使用する予定である。
リコンビナント断片化TTRに対する抗体の作成に関して使用する予定である。

研究成果

• [雑誌論文] Generation of familial amyloidotic polyneuropathy-specific induced pluripotent stem cells. (2014)
  • 著者名/発表者名: Isono K, Jono H, Ohya Y, Shiraki N, Yamazoe T, Sugasaki A, Era T, Fusaki N, Tasaki M, Ueda M, Shinriki S, Inomata Y, Kume S, Ando Y.
  • 雑誌名: Stem Cell Res 巻: 12 ページ: 574-583
  • DOI: 10.1016/j.scr.2014.01.004.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Stromal Expression of Neutrophil Gelatinase-Associated Lipocalin Correlates with Poor Differentiation and Adverse Prognosis in Oral Squamous Cell Carcinoma. (2014)
  • 著者名/発表者名: Shinriki S, Jono H, Ueda M, Obayashi K, Nakamura T, Ota K, Ota T, Sueyoshi T, Guo J, Hayashi M, Hiraki A, Nakayama H, Yamashita S, Shinohara M, Ando Y.
  • 雑誌名: Histopathology 巻: 64 ページ: 356-364
  • DOI: 10.1111/his.12293.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Changes in pathological and biochemical findings of systemic tissue sites in familial amyloid polyneuropathy more than 10 years after liver transplantation. (2013)
  • 著者名/発表者名: Oshima T, Kawahara S, Ueda M, Kawakami Y, Tanaka R, Okazaki T, Misumi Y, Obayashi K, Yamashita T, Ohya Y, Ihse E, Shinriki S, Tasaki M, Jono H, Asonuma K, Inomata Y, Westermark P, Ando Y.
  • 雑誌名: J Neurol Neurosurg Psychiatry 巻: epub ページ: epub
  • DOI: 10.1136/jnnp-2013-305973
  • 査読あり
• [雑誌論文] Effect of age and sex differences on wild-type transthyretin amyloid formation in familial amyloidotic polyneuropathy: a proteomic approach. (2013)
  • 著者名/発表者名: Tasaki M, Ueda M, Obayashi K, Koike H, Kitagawa K, Ogi Y, Jono H, Su Y, Suenaga G, Oshima T, Misumi Y, Yoshida M, Yamashita T, Sobue G, Ando Y.
  • 雑誌名: Int J Cardiol 巻: 170 ページ: 69-74
  • DOI: 10.1016/j.ijcard.2013.10.033.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Dominant cardiac type of familial amyloidotic polyneuropathy associated with a novel transthyretin variant Thr59Arg. (2013)
  • 著者名/発表者名: Obayashi K, Misumi Y, Watanabe T, Ando T, Akagami T, Tasaki M, Shinriki S, Ueda M, Yamashita T, Shinichi H, Ando Y.
  • 雑誌名: Muscle Nerve 巻: 48 ページ: 839-841
  • DOI: 10.1002/mus.23939.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Marked cardiomegaly in a patient with familial amyloidotic polyneuropathy after orthotopic liver transplantation: a case study. (2013)
  • 著者名/発表者名: Sakashita N, Kagawa S, Date R, Ueno T, Nakagawa T, Yamashita T, Obayashi K, Ohshima T, Ueda M, Horiguchi H, Ando Y, Takeya M.
  • 雑誌名: Pathol Int 巻: 63 ページ: 260-265
  • DOI: 10.1111/pin.12055.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Amyloid fibrils containing fragmented ATTR may be the standard fibril composition in ATTR amyloidosis. (2013)
  • 著者名/発表者名: Ihse E, Rapezzi C, Merlini G, Benson M, Ando Y, Suhr O, Ikeda SI, Lavatelli F, Obici L, Quarta C, Leone O, Jono H, Ueda M, Lorenzini M, Liepnieks J, Ohshima T, Tasaki M, Yamashita T, Westermark P.
  • 雑誌名: Amyloid 巻: 20 ページ: 142-150
  • DOI: 10.3109/13506129.2013.797890.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Impact of antibodies against amyloidogenic transthyretin (ATTR) on phenotypes of patients with familial amyloidotic polyneuropathy (FAP) ATTR Valine30Methionine. (2013)
  • 著者名/発表者名: Obayashi K, Tasaki M, Jono H, Ueda M, Shinriki S, Misumi Y, Yamashita T, Oshima T, Nakamura T, Ikemizu S, Anan I, Suhr O, Ando Y.
  • 雑誌名: Clin Chim Acta 巻: 419 ページ: 127-131
  • DOI: 10.1016/j.cca.2013.02.002.
  • 査読あり
• [学会発表] Fragmentation of amyloid-forming transthyretin in cultured cells and a test tube. (2013)
  • 著者名/発表者名: Ueda M, Kluve-Beckerman B, Liepnieks J, Mizuguchi M, Ando Y, Benson M.
  • 学会等名: The VIIIth International Symposium on Familial Amyloidotic Polyneuropathy.
  • 発表場所: Rio de Janeiro, Brazil
  • 年月日: 20131110-20131113
• [学会発表] FAP病態の鍵を握るトランスサイレチン断片化機構の解明と検出 (2013)
  • 著者名/発表者名: 植田 光晴、Barbara Kluve-Beckerman、Juris J. Liepnieks、田崎 雅義、大林 光念、Merrill D. Benson、安東 由喜雄
  • 学会等名: 第60回 日本臨床検査医学会学術集会
  • 発表場所: 神戸
  • 年月日: 20131031-20131103
• [学会発表] FAPの病態の鍵を握るトランスサイレチン断片化機構の解析． (2013)
  • 著者名/発表者名: 植田光晴、Barbara Kluve-Beckerman、Juris J. Liepnieks、水口峰之、安東由喜雄、Merrill D. Benson．
  • 学会等名: 第54回日本神経学会総会
  • 発表場所: 東京
  • 年月日: 20130529-20130601
• [図書] アミロイドーシス検査における質量分析 (2013)
  • 著者名/発表者名: 植田光晴、安東由喜雄
  • 総ページ数: 115-120
  • 出版者: 診断と治療社