| 研究概要 |
緑内障は視神経の特徴的な構造的・機能的異常をきたす疾患であり、中途失明の原因の第一位を占めている。しかし、そのメカニズムについては未解明の部分も多い。
本研究では、緑内障の病態の解明のため、各種障害を与えた疾患モデル動物を用いて、神経損傷・保護に機能する遺伝子およびその分子機構の探索・同定を目的とする。そのために、RNAi法を用いた探索を行う。すなわち、種々の遺伝子をRNAiによりノックダウンし、それによって現れる影響を疾患モデルにより機能面から評価することで新規機能性遺伝子を同定し、その詳細を分子生物学的手法と機能プローブを用いたイメージングなどの手法を駆使することで解析する。
そのためにまずは、緑内障モデルにおける眼内でのin vivo RNAi法の確立を目指した。発現解析（Yasuda et al., 2014 in press）から得られた小胞体ストレス関連の遺伝子をターゲットとして、作製した種々のsiRNAおよびshRNA発現ベクターを用いてRNAiの手法とその導入方法等に関して条件検討を行った。その結果、shRNA発現ベクターをアデノ随伴ウイルスを用いて網膜神経節細胞に遺伝子導入する方法において、緑内障モデルでの標的遺伝子の有意な発現量の低下とさらにその下流の遺伝子の発現の変動が見られた。このことは、この方法が緑内障モデルにおける有効なRNAi法であることを示している。
現在は、緑内障モデルマウスの発現解析により得られた遺伝子をRNAi法によりノックダウンし、機能面から評価することで候補遺伝子の絞り込みを行っている。
本研究により、緑内障をはじめとした難治性網膜疾患がもたらす神経損傷の分子機構の解明と神経保護薬の開発につながることが期待される。
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