| 研究実績の概要 |
末梢神経損傷に対するシュワン細胞移植の効果が過去の研究により報告されており，人工多能性幹細胞(iPSC; induced pluripotent stem cell)由来神経堤幹細胞(NCSC; neural crest stem cell)はそのシュワン細胞を作成するソースとして期待されており本研究の目的は、iPSCから簡便な方法でNCSCを分化誘導することである．ヒトiPSCを，Matrigelコーティングしたプラスチックディッシュ上でRhoキナーゼ(ROCK)阻害薬を添加したips maintenance mediumを用いて単層培養を施行．KSR mediumへ交換して4日間培養したのち，KSR mediumから神経系細胞培養液へ徐々に濃度を変化させていき，約12日で分化させた．BMPアンタゴニストであるNogginおよびALK阻害剤であるSB431542は分化誘導中同じ濃度で継続して添加した．分化の指標としてNCSCのマーカーであるp75, HNK-1, iPSCのマーカーであるSOX2について免疫細胞化学染色ならびにフローサイトメトリーによる評価を行った．免疫化学染色では，iPSCはp75とHNK-1が陰性，SOX2が陽性であったのに対し，分化後の細胞はp75とHNK-1が陽性，SOX2が陰性であった。同様に，フローサイトメトリーにおいても，iPSCはp75，HNK-1ともに陰性であったのに対し，分化後の細胞では両者ともに陽性である細胞が63％存在した．以上の結果より，iPSCがNCSCへ分化したと考えられた．次に、免疫不全マウスであるNOD/SCIDマウスの坐骨神経圧挫モデルを作成、分化させたNCSCを移植した．移植群と非移植群を移植後1,2週で圧挫部をHE染色し比較したところ,形態に有為差は認めず、腫瘍形成も認めなかった。
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