| 研究概要 |
機能的かつ審美的なインプラントおよび補綴歯科治療の実現には，低侵襲で確実な歯槽骨増生が不可欠であることから，骨補填材を用いた骨増生術にBMP2 やPDGF などの細胞成長因子を併用する試みが広く行われている。、本研究の目的は，骨芽細胞分化促進作用を有する化合物を簡便かつ高い信頼度で検出するためのスクリーニングシステムの構築，ならびに骨芽細胞分化促進作用および骨形成促進作用を有する化合物の探索することである。
これまでに我々は，マウスの骨芽細胞分化マーカー（I型コラーゲン）を組み込んだ細胞を骨芽細胞分化誘導によってGFPが発光すると同時にマーカー遺伝子発現が亢進することを確認し，得られたクローナルな細胞株が，骨芽細胞への分化能を維持していることを，RT-PCR解析（Osterix, Osteopontin, Osteocalcin遺伝子発現），フォンコッサ染色により確認した。
次にレポーター細胞株を用い，小分子化合物ライブラリーのスクリーニングを，二つの骨分化指標についてハイスループットに行うった。
レポーター細胞株を96ウェルプレートに播種し，骨分化誘導培地中に各化合物を添加，培養し，4～7日後に細胞のGFP発光量を，マルチプレートリーダー（GloMax-Multi Detection System, Promega社）でハイスループットに測定し，GFP発光量を亢進した小分子化合物を候補化合物とした。
GFP測定後，引き続き分化誘導培地で培養し，誘導14日後にフォンコッサ染色を行い，基質の石灰化を促進した小分子化合物を候補化合物とした。
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