2013 年度実績報告書

DJ-1欠失誘導性ミトコンドリア膜透過性遷移孔開口によるパーキンソン病新規モデル

研究課題

研究課題/領域番号	25893163
研究種目	研究活動スタート支援
研究機関	九州大学
研究代表者	山口浩雄九州大学, 大学病院, 助教 (00701830)
研究期間 (年度)	2013-08-30 – 2015-03-31
キーワード	パーキンソン病 / 酸化ストレス / DJ-1
研究概要	当初の実験計画ではDJ-1 ノックアウトマウス(DJ-1-/-)とSOD2(Superoxide Dismutase2)ノックアウトマウス(SOD2+/-）を交配させDJ-1-/- SOD2+/-マウスを作成し、抗酸化作用を低減させることでPD マウスモデルを樹立することをめざしていたが、研究を開始した直後に同一のDJ-1-/- SOD2+/-マウスを作成し解析した論文が発表された（Hennis et al. PLoS One. 2013 Dec 26;8(12)）。論文によるとDJ-1-/- SOD2+/-マウスは、黒質ドパミンニューロンの脱落は示していない。このことは、SOD2+/-マウスでは抗酸化作用の低減が十分ではないことを示している。そこで当初の計画を変更し私たちは、ドパミンニューロン特異的なSOD2ノックアウトマウスの作成を行うこととした。平成２５年度に行ったことあらたに動物実験計画書の提出を本学に行い、承認を得たのち、ドパミンニューロン特異的なSOD2ノックアウトマウスを増やし、マウスコロニーの作成を行っている。
現在までの達成度 (区分)	現在までの達成度 (区分) 3: やや遅れている理由当初の実験計画を変更し、あらたに動物実験計画書の提出を本学に行い、承認を得たのち、必要なマウスを入手した。このため、当初の計画より遅れている。
今後の研究の推進方策	平成２６年度動物モデルを用いた実験　ひきつづきドパミンニューロン特異的なSOD2ノックアウトマウスを十分な数まで増やし、マウスコロニーの作成を続ける。このマウスにおけるDJ-1SOD2蛋白の黒質ドパミンニューロンにおける発現をウエスタンブロット、免疫染色で検討する。ドパミンニューロン特異的なSOD2ノックアウトマウス３か月年齢のマウスで行動解析（オープンフィールドテスト、ロタロッドテスト等）を行う。同マウス脳の生化学的解析（線条体ドパミン定量(HPLC),酸化損傷の解析(oxybloy)),組織学的解析(TH, GFAP,SOD2, DJ-1 染色等)を行う。さらに同マウスの黒質ドパミンニューロンの数をstereology により解析する。細胞モデルを用いた実験　ドパミンニューロン特異的なSOD2ノックアウトマウス脳よりドパミンニューロンを培養し、ミトコンドリア機能（ミトコンドリア膜電位、mPTPのopening）とニューロンの生存率を検討する。孤発性PDの細胞モデルとして、野生型マウス培養ドパミンニューロンに酸化ストレス（H2O2,MPTP)を負荷し、ミトコンドリア機能を解析する