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我々は、造血幹細胞とその娘細胞での単一細胞網羅的遺伝子発現解析を行い、その遺伝子発現プロファイルを指標とした細胞分裂様式の解析法を確立してきた (Paired Daughter Cell (PDC) アッセイ法)。本年は、ファイブロネクチンでコートされたpolyethylene glycol (PEG) hydrogel micro well上での造血幹細胞培養で生じる娘細胞の限界希釈移植実験を終了し、培地へのAngiopoietin1 (Angpt1)添加によって長期骨髄再構築能をもつ娘幹細胞がより高い割合で生じることを示唆するデータを得た。くわえて、昨年度からの一連の限界希釈移植実験により、同じAngpt1添加条件であっても、通常の細胞培養プレートに比べファイブロネクチンコートされたPEG hydrogel micro well上では、さらに高い割合で娘幹細胞が生じることが分かった。また、これらの移植実験の結果はPDCアッセイ法による娘細胞の幹細胞性の評価結果とよく相関するものであった。続いて、長期培養を視野に、ファイブロネクチンコートされた通常の細胞培養プレート上で１つの造血幹細胞から生じる2ペアの paired grand daughter cellsを採取して単一細胞網羅的遺伝子発現解析を行い、幹細胞性の評価を行った。この場合には全ての細胞が前駆細胞に分類されてしまい、一般の細胞培養プレートでは造血幹細胞の維持が困難であることが浮き彫りとなった。今後は、PEG hydrogel microwellをファイブロネクチン以外の細胞外マトリックス、細胞接着分子で修飾し、より長期的な幹細胞の維持が可能となるか検討する必要がある。現在、N-カドヘリンで修飾したPEG hydrogel microwellを用いて研究を行っている
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