Rif1タンパク質による複製、組換え、修復，転写などの包括的制御機構の解明

2014 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 26251004
• 研究機関: 公益財団法人東京都医学総合研究所
• 研究代表者: 正井 久雄 公益財団法人東京都医学総合研究所, ゲノム医科学分野, 副所長 (40229349)
• 研究期間 (年度): 2014-04-01 – 2017-03-31
• キーワード: 染色体 / 核 / DNA複製 / 組換え / 修復 / 転写 / Rif1タンパク質 / DNA結合

研究実績の概要

動物細胞発現系を用いて、Rif1全長　あるいはRif1のC端・N端由来のポリペプチドを発現し、可溶化画分に回収できることを確認した。また、さらにaffinity カラムを用いて精製した。
これらのタンパク質を電子顕微鏡で観察した。まだ不純物が多いので、厳密な結果は得られなかったが、巨大な複合体が観察された。

現在までの達成度 (区分)

2: おおむね順調に進展している

理由

大腸菌での精製が困難であったRif1タンパク質を動物細胞で発現し可溶性画分に回収し、精製することができた。G4DNA結合に必要なドメインなどのマッピングも行った。また、精製した標品を用いて、Rif1分子の電子顕微鏡観察を行った。

今後の研究の推進方策

さらに精製を行い不純物を除去し、濃度の高い標品を得て、電子顕微鏡で観察し、単粒子解析により形態を推定する。またDNAとの複合体を電子顕微鏡で観察しクロマチンループ構造の形成を実際に可視化できるか検討する。

備考

http://www.igakuken.or.jp/genome/

研究成果

• [雑誌論文] NCOA4 Transcriptional Coactivator Inhibits Activation of DNA Replication Origins. (2014)
  • 著者名/発表者名: Bellelli, R., Castellone, M.D., Guida, T., Limongello, R., Dathan, N.A., Merolla, F., Cirafici, A.M., Affuso, A., Masai, H., Costanzo, V., Grieco, D., Fusco, A., Santoro, M., and *Carlomagno, F.
  • 雑誌名: Mol. Cell 巻: 55 ページ: 123-137
  • DOI: 10.1016/j.molcel.2014.04.031. Epub 2014 Jun 5.
  • 査読あり / 国際共著 / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Cell cycle synchronization and flow cytometry analysis of mammalian cell. (2014)
  • 著者名/発表者名: Yoshizawa-Sugata, N. and *Masai, H.
  • 雑誌名: Methods in Molecular Biology 巻: 1170 ページ: 279-293
  • DOI: 10.1007/978-1-4939-0888-2_13.
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] ATM in prevention of genomic instability. (2014)
  • 著者名/発表者名: Hisao Masai
  • 雑誌名: Cell Cycle 巻: 13 ページ: 882-883
  • DOI: 10.4161/cc.28216.
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Temporal and spatial regulation of eukaryotic DNA replication: from regulated initiation to genome-scale timing program. (2014)
  • 著者名/発表者名: Renard-Guillet, C., Kanoh, Y., Shirahige, K., and *Masai, H.
  • 雑誌名: Seminars in Cell & Developmental Biology 巻: 30 ページ: 110-120
  • DOI: 10.1016/j.semcdb.2014.04.014.
  • 査読あり / 国際共著 / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Regulation and roles of Cdc7 kinase under replication stress. (2014)
  • 著者名/発表者名: Yamada, M., Masai, H., and *Bartek, J.
  • 雑誌名: Cell Cycle 巻: 13 ページ: 1859-1866
  • 査読あり / 国際共著 / 謝辞記載あり
• [学会発表] ゲノムDNA複製制御のメカニズム：生物種を超えた統一像と多様性 (Conserved mechanisms and diversity of genome DNA replication: from bacteria to human) (2014)
  • 著者名/発表者名: 正井 久雄
  • 学会等名: 第37回日本分子生物学会年会
  • 発表場所: パシフィコ横浜（神奈川県横浜市）
  • 年月日: 2014-11-25 – 2014-11-27
  • 招待講演
• [学会発表] Regulation of mammalian Mcm helicase complexes (2014)
  • 著者名/発表者名: Hisao Masai, You Zhiying, Koji L. Ode, Naoko Kakusho, Rino Fukatsu, and Haruhiko Takisawa
  • 学会等名: 第87回日本生化学会大会 シンポジウム
  • 発表場所: 国立京都国際会館（京都府京都市）
  • 年月日: 2014-10-15 – 2014-10-18
  • 招待講演
• [学会発表] ゲノムを支えるDNAヘリカーゼの動態を探求する新たな研究展開 (2014)
  • 著者名/発表者名: 正井 久雄
  • 学会等名: 第87回日本生化学会大会シンポジウム
  • 発表場所: 国立京都国際会館（京都府京都市）
  • 年月日: 2014-10-15 – 2014-10-18
• [学会発表] 染色体DNA複製プログラムの制御機構 (2014)
  • 著者名/発表者名: 正井 久雄
  • 学会等名: 大阪大学蛋白質研究所セミナー「染色体伝承の分子背景：複製から染色体分離まで」
  • 発表場所: 大阪大学（大阪府豊中市）
  • 年月日: 2014-09-25 – 2014-09-26
  • 招待講演