研究課題
Hikeshiは、熱ストレス時に分子シャペロンHsp70を核に運ぶ運搬体分子である。蛍光相互相関法の解析から、HikeshiとHsp70は熱に依存して結合することがわかり、熱が、HikeshiによるHsp70の核内輸送を活性化する一つの重要な要因であると考えられる。一方で、Hikeshiの点変異や欠損で、ヒト疾患が誘引され、マウスが致死になることから、Hikeshiの機能が熱ストレスだけでは説明ができないこともわかってきた。そこで、CRSPR/Cas9システムでHikeshiをノックアウトしたHeLa細胞の正常時、熱ストレス時、ストレス解除時の遺伝子発現プロファイルをRNA-seqで解析した。その結果、Hikeshiをノックアウトしただけで、熱ストレスをかけていない正常時に、転写因子HSF1ターゲット遺伝子の発現が緩やかに上昇することがわかった。また、熱ストレス解除時に、HSF１の不活性化が遅延する。つまり、Hikeshiをノックアウトした細胞では、熱ストレスに関係なく、タンパク質の恒常性が崩れて、タンパク質毒性ストレス応答がおこると考えられる。またHikeshiとHsp70シャペロンシステムの相互作用を、変性ルシフェラーゼを利用したHsp70フォールディング活性を測定する生化学的解析で調べた。その結果、Reticulocyte lysateを使っても、組み替えタンパク質を使った精製系でも、Hikeshiを添加すると、Hsp70のフォールディング活性が阻害されることがかった。このことから、Hikeshiは熱ストレスの有無に関係なく、Hsp70シャペロンシステムと相互作用することがわかった。以上の結果より、Hikeshiは、正常時でも、Hsp70シャペロンシステムとの相互作用を通して転写因子HSF1の活性を制御することで、様々な生体機能に影響を及ぼすことが考えられる。
28年度が最終年度であるため、記入しない。
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